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抗口臭致病菌Solobacterium moorei特异性IgY的活性研究

作　者: 刘贺
导　师: 李晓宇
学　校: 大连理工大学
专　业: 生物工程
关键词: 卵黄抗体 Solobacterium moorei 口臭
分类号: R392.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


口臭是影响人们日常社交及生活的一种常见疾病。大量研究证实Solobacterium moorei与口臭有着紧密联系,并确定S. moorei为口臭致病菌之一。本研究以S. moorei全菌为免疫原免疫来航蛋鸡。分离卵黄,经水稀释,硫酸铵盐析、硫酸钠盐析、超滤等分离纯化IgY。分析SDS-PAGE电泳结果表明,IgY纯度为87.3%。ELISA检测IgY效价结果可见,三次免疫后第十天的抗体效价达到最高,为1：10000,且可持续2周。抗S. moorei特异性IgY与其他主要口臭致病菌牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、中间普氏菌有很弱的交叉反应,说明抗S. moorei IgY具有很强的特异性。使用含抗S.moorei特异性IgY的GAM液体培养基培养S. moorei,每隔12h于600nm处检测OD值,分析IgY对S. moorei生长的影响。结果显示,20 mg/ml及40 mg/ml的IgY均能显著抑制S. moorei的生长(P<0.05),且40 mg/ml的IgY作用效果更强。通过菌体结晶紫染色的方法检测IgY对S. moorei生物被膜形成的抑制作用。结果显示,20 mg/ml及40 mg/ml的IgY均能显著抑制S. moorei生物被膜的形成(P<0.05),且有一定剂量依赖性。免疫荧光与免疫电镜结果表明,IgY是通过与菌体的特异性结合发挥抑制作用,但并不改变菌体形态。每隔两天给小鼠口腔内接种一次109CFU/ml的S. moorei 0.1ml,持续一周。在攻毒前一天及攻毒完成次日取小鼠口腔样本,涂布于JCM 14号培养基及OHOC培养基,以测定小鼠口腔内厌氧菌总数及S. moorei的数量变化,鉴定S. moorei是否成功定植。攻毒完成后,每隔5天口腔灌服0.1 m1浓度为40 mg/ml的特异性IgY,持续6周后,取口腔样本涂布于JCM 14号培养基及OHOC培养基中进行统计。结果表明IgY组与阴性对照组相比,小鼠口腔内厌氧菌及S. moorei的数量显著降低(P<0.05)。检测小鼠血液中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性以及溶菌酶和丙二醛(MDA)含量结果显示,饲喂IgY小鼠的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性和溶菌酶含量显著提高而丙二醛含量明显降低,说明IgY能提高机体抗氧化能力及免疫力。本研究制备了抗S. moorei特异性卵黄抗体,并证实IgY在体外和体内都能对S. moorei有显著的抑制作用,为防治S. moorei感染引起的口臭提供了新的途径。

全文目录


摘要  4-5Abstract  5-10引言  10-111 文献综述  11-25  1.1 口臭的研究进展  11-15    1.1.1 口臭的分类  11-12    1.1.2 口臭的病因分析  12-13    1.1.3 口臭的诊断  13-14    1.1.4 口臭的治疗  14-15  1.2 Solobacterium moorei的研究进展  15-18    1.2.1 S.moorei的鉴定及培养  16-17    1.2.2 S.moorei的致病性  17-18  1.3 IgY的研究进展  18-24    1.3.1 IgY的结构  19-20    1.3.2 IgY的性质  20-21    1.3.3 IgY的纯化  21-22    1.3.4 IgY的应用  22-24  1.4 本论文的研究目的及主要工作  24-252 抗S.moorei特异性IgY的制备及纯化  25-35  2.1 前言  25  2.2 实验材料及设备  25-28    2.2.1 实验动物  25    2.2.2 菌种  25    2.2.3 试剂  25-26    2.2.4 仪器  26    2.2.5 试剂配制  26-28  2.3 实验方法  28-30    2.3.1 细菌的培养及免疫原制备  28-29    2.3.2 蛋鸡免疫  29    2.3.3 水溶性组分的制备  29    2.3.4 酶联免疫法(ELISA)检测抗体效价  29-30    2.3.5 IgY的交叉免疫活性检测  30    2.3.6 IgY的分离纯化  30    2.3.7 SDS-PAGE纯度检测  30  2.4 实验结果  30-33    2.4.1 棋盘法检测抗原最佳包被浓度  31    2.4.2 抗体效价检测  31-32    2.4.3 IgY免疫交叉活性  32    2.4.4 SDS-PAGE纯度检测  32-33  2.5 讨论  33-34  2.6 小结  34-353 特异性IgY对S.moorei的体外抑制作用  35-42  3.1 前言  35  3.2 实验材料及设备  35-36    3.2.1 实验菌种  35    3.2.2 试剂  35    3.2.3 仪器  35-36    3.2.4 溶液配制  36  3.3 实验方法  36-37    3.3.1 IgY的体外抑菌实验  36    3.3.2 IgY抑制细菌生物被膜形成的检测  36-37    3.3.3 免疫荧光  37    3.3.4 免疫电镜  37  3.4 实验结果  37-40    3.4.1 IgY对S.moorei生长的抑制作用  37-38    3.4.2 IgY对生物被膜形成的影响  38-39    3.4.3 免疫电镜与免疫荧光  39-40  3.5 讨论  40-41  3.6 小结  41-424 特异性IgY在体内的抑制作用  42-53  4.1 前言  42  4.2 实验材料及设备  42-43    4.2.1 菌种  42    4.2.2 实验动物  42    4.2.3 试剂  42    4.2.4 仪器  42-43    4.2.5 培养基配制  43  4.3 实验方法  43-44    4.3.1 动物实验设计  43-44    4.3.2 指标检测  44  4.4 实验结果  44-51    4.4.1 免疫及抗氧化能力检测  44-47    4.4.2 小鼠口腔菌群变化  47-51  4.5 讨论  51-52  4.6 小结  52-53结论  53-54参考文献  54-60攻读硕士学位期间发表学术论文情况  60-61致谢  61-62

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学 > 免疫生物学
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