学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
组蛋白乙酰化修饰调控IL-4/STAT6信号转导通路基因转录活性的分子机制的研究
作 者: 付晓
导 师: 杨洁
学 校: 天津医科大学
专 业: 免疫学
关键词: PSF蛋白 STAT6蛋白 STAT6-TAD Igε 组蛋白H3乙酰化
分类号: R392
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 127次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
研究目的:细胞因子与其受体结合后启动复杂的细胞内分子间的相互作用,最终引起细胞基因转录的变化,这一过程称为细胞的信号转导。STAT6是信号转导和转录激活因子STATs家族的一员,可被细胞因子IL-4特异性激活。IL-4与其受体结合后,循JAK/STAT6信号转导通路,将活化信号通过蛋白质的相互作用逐级传递,最终激活特异性转录激活因子STAT6并启动靶基因的转录与表达,促进靶蛋白的合成。IL-4/STAT6信号通路的过度活跃参与包括哮喘等变态反应性疾病、肿瘤等多种疾病的进程。大量研究显示STAT6-TAD可结合一系列转录共激活因子p100、CBP和NCoA-1等来提高STAT6介导的转录活性和基因表达水平。但迄今为止,STAT6转录调控的机制尚不明确。PSF蛋白是我们前期通过GST融合蛋白钓取结合质谱分析技术发现的在IL-4刺激后可与STAT6-TAD结合的抑制IL-4/STAT6信号转导通路靶基因之一—Igε基因转录活性的转录抑制因子。我们前期的细胞内实验证实了IL-4刺激后PSF可将HDAC1募集到STAT6转录复合物中。本课题的研究目的在于初步探讨组蛋白乙酰化修饰调控IL-4/STAT6信号传导通路基因转录活性的分子机制。方法:本课题分两部分进行:第一部分采用激光共聚集显微镜观察法与免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipitation)来研究PSF与STAT6特异性结合及两者结合的功能片段。第二部分是采用染色质免疫共沉淀法(Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP)验证PSF通过影响特异性组蛋白乙酰化修饰来调控IL-4/STAT6信号转导通路转录活性及采用甘油密度梯度离心法分离蛋白复合物,探讨随着IL-4刺激时间的延长,PSF如何参与组成STAT6转录活性相关的HDACs复合物。结果:①IL-4刺激后PSF与STAT6呈现细胞内共定位;PSF通过STAT6-TAD与STAT6在细胞内直接结合;IL-4诱导STAT6与PSF发生酪氨酸磷酸化是二者结合的先决条件②PSF影响Igε启动子区域组蛋白乙酰化,抑制Igε启动子的基因表达;ChIP揭示IL-4刺激后TSA处理影响Igε启动子区域组蛋白乙酰化状态从而增强Igε启动子的基因表达;随着IL-4刺激时点的延长,PSF作为基因转录抑制因子,通过募集HDAC1等蛋白因子形成HDACs复合物,动态性参与调控IL-4/STAT6介导的基因转录活性。结论:①IL-4诱导STAT6与PSF酪氨酸磷酸化后,PSF与STAT6-TAD结合,发挥其基因转录抑制作用。②PSF作为基因转录抑制因子,通过募集HDAC1等蛋白因子形成HDACs复合物,影响Igε启动子区域组蛋白乙酰化,抑制Igε启动子的基因表达。
|
全文目录
中文摘要 4-6 Abstract 6-10 缩略语 10-13 前言 13-20 研究现状、成果 13-18 研究目的、方法 18-20 一、PSF蛋白与STAT6蛋白6的特异性结合 20-42 1.1 对象和方法 20-35 1.1.1 细胞与质粒 20-21 1.1.2 主要试剂 21-22 1.1.3 主要溶液、缓冲液与培养基 22-26 1.1.4 主要仪器、设备 26-27 1.1.5 实验方法及流程 27-35 1.2 结果 35-39 1.2.1 PSF与STAT6细胞内共定位实验 35-36 1.2.2 PSF蛋白与STAT6蛋白的结合位点实验 36-37 1.2.3 磷酸化STAT6与PSF结合实验 37-39 1.3 讨论 39-41 1.4 小结 41-42 二、PSF抑制Igε基因转录活性分子机制的研究 42-57 2.1 对象和方法 43-49 2.1.1 细胞和质粒 43 2.1.2 引物 43 2.1.1 主要试剂 43 2.1.4 主要溶液、缓冲液与培养基 43-45 2.1.5 仪器设备 45-46 2.1.6 实验方法及流程 46-49 2.2 结果 49-53 2.2.1 PSF降低组蛋白乙酰化,抑制Ace-H3与Igε启动子的结合能力 49-50 2.2.2 TSA增加组蛋白乙酰化,增强Ace-H3与Igε启动子的结合能力 50-51 2.2.3 PSF参与组成STAT6转录活性相关的HDACs复合物的实验 51-53 2.3 讨论 53-56 2.4 小结 56-57 结论 57-59 本课题结论 57 课题展望 57-59 参考文献 59-66 发表论文和参加科研情况说明 66-67 综述 组蛋白乙酰化修饰在基因表达调控中的作用机制 67-80 综述参考文献 75-80 致谢 80
|
相似论文
- IL-4/STAT6信号转导通路中Igε基因转录抑制分子机制的初探,R346
- STAT6基因RNAi表达载体的构建及其沉默效应观察,R346
- 曲古抑素A(TSA)预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用及机制研究,R965
- TSA在脑缺血再灌注损伤中的脑保护机制,R965
- 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
- 乙型脑炎病毒NS1蛋白的新型prime-boost免疫策略研究,R392
- 重组hIL-10抗家兔皮肤移植排斥反应及其对IL-2、IFN-γ、GCs、T细胞凋亡的影响,R392
- 经脾脏注射未成熟树突状细胞对大鼠小肠移植免疫耐受诱导作用的研究,R392
- 抗原性弱化的绿脓杆菌外毒素A-靶向性免疫毒素的构建与重组表达,R392
- 急性乙型肝炎患者HBV特异性CD8~+T淋巴细胞受体α和β链取用的研究,R392
- HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察,R392
- 密码子优化对乙肝病毒表面抗原中蛋白核酸疫苗免疫原性的影响,R392
- 免疫球蛋白G在成年大鼠肝脏细胞中的表达,R392
- 血浆Exosomes生物学特征及血浆Exosomes对巨噬细胞功能影响的初步研究,R392.1
- 幽门螺杆菌重组Bb-vacA-hpaA候选疫苗的构建,R392
- 复方萘酚阿奇对延缓恶性疟原虫抗性的实验性研究,R392
- 人白介素-1受体拮抗剂融合蛋白的构建、表达及生物学活性鉴定,R392.1
- 泰素对调节性和效应性T细胞的不同作用及其机制研究,R392
- 肿瘤细胞对CD4~+Foxp3~+调节性T细胞影响的临床和实验研究,R392
- 环介导等温扩增技术检测疟原虫方法的建立及其应用,R392
中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|