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抗牛PrP多肽单克隆抗体的制备及其在牛PrP检测中的应用

作　者: 赵丽
导　师: 洪涛
学　校: 山东大学
专　业: 病原生物学
关键词: 可传播性海绵样脑病朊蛋白朊病毒基因表达抗体单克隆免疫组织化学
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

可传播性海绵样脑病（Transmissible spongiform encephalopathies,TSE）,又称朊病毒病（Prion diseases）,是一类神经系统退行性致死性疾病,该病的致病因子PrP^Sc不同于其它微生物,它由主要存在于神经细胞表面的朊蛋白（PrP^c）构象改变所致,仅由蛋白质组成,对蛋白酶K（PK）具有抗性,主要在中枢神经系统沉积,导致神经细胞空泡样变,宿主出现一系列临床症状,如共济失调、痴呆等。PrP^c构象的改变是致病的根本原因,PrP^c二级结构以α螺旋为主,PrP^Sc二级结构β折叠为主。人类TSE主要有克雅氏症（Creutzfeldt-Jakob discase,CJD）,新型变异CJD（new variant CJD,nvCJD）,GSS综合症（Gerstamann Straussler syndrome,GSS）、致死性家族性失眠症（Fetal familial insomnia,FFI）,动物的TSE主要有牛海绵样脑病（Bovine spongiform encephalopathy,BSE）,羊瘙痒病（Scrapie of goat or sheep）等。该病可通过多种途径传播,如消化道、医源性途径（器官移植、神经外科、血液等）等,潜伏期很长,一般5～15年,一旦发病,100%的感染者在数月内死亡。目前TSE的发病机理还不清楚,也无有效的治疗方法,特异性诊断主要依靠脑组织中PrP^Sc检测,检测方法主要是免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）、Western blot、ELISA等免疫学方法。为了研究TSE的致病机理、建立特异、灵敏的PrP^Sc检测方法。我们以外周血中提取的牛（Bovine,Bo）、仓鼠（Hamster,Ha）、人（Human,Hu）基因组DNA为模板,PCR扩增并克隆BoPrP（25～242）、HaPrP（23～231）、HuPrP（23～231）基因;并对其序列进行了对比研究;以pGEMCS为表达载体,在M15大肠杆菌中分别表达BoPrP（25～242）-GST、HaPrP（23～231）-GST、HuPrP（23～231）-GST融合蛋白,用Western bolt鉴定了所表达蛋白;通过氨基酸序列对比选择了对应于BoPrP29～48（BoP₁）、BoPrP89～108（BoP₂）、

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
符号说明  12-14
前言  14-23
第一部分牛、仓鼠、人PrP基因克隆及表达  23-42
  材料与方法  23-30
  结果  30-40
  讨论  40-42
第二部分抗牛PrP多肽McAbs的制备及初步鉴定  42-59
  材料与方法  42-47
  结果  47-56
  讨论  56-59
第三部分抗牛PrP多肽McAbs在牛PrP检测中的应用  59-85
  材料与方法  59-63
  结果  63-66
  讨论  66-70
  免疫组化结果照片  70-85
参考文献  85-98
攻读博士学位期间发表论文及获奖情况  98-100
致谢  100-101

抗牛PrP多肽单克隆抗体的制备及其在牛PrP检测中的应用

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