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应用多种方法检测人乳头状瘤病毒与乳腺癌关系的研究

作　者: 郭雯
导　师: 王岭；姚青；王廷
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 乳腺癌 HPV-16 HPV-18 实时荧光定量PCR 透射电镜
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

乳腺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,每年全世界约有130万人被诊断为乳腺癌,而有约40万人死于该病。根据世界卫生组织公布的统计资料(GLOBOCAN2000:Cancer Incidence, Mortality and Prevalence Worldwide, Version 1.0),2000年全球女性乳腺癌的新发病例超过100万,标化发病率为35.66/10万,标化死亡率为12.51/10万。从世界范围来看,乳腺癌已成为全球妇女首发的恶性肿瘤。近20年来,我国乳腺癌的发病率也呈逐年上升趋势,尤其在京、津、沪等大城市,乳腺癌已位居女性恶性肿瘤发病率之首,严重危害广大妇女的健康[1]。乳腺癌的病因有很多,包括不育、生育次数少、第一胎足月产年龄晚、初潮年龄早、良性乳腺疾病史、乳腺癌家族史、放射线暴露等因素已经被确认与乳腺癌有关。但是乳腺癌发生的分子机制尚不完全清楚。因此研究其发病原因对于人类攻克乳腺癌这一难关有着重要意义。高危型人乳头状瘤病毒(HPV)经证明是宫颈癌的主要成因,比如HPV 16、18、31、33和39。同时,HPV也被认为是其他部位发生鳞状细胞癌的原因,比如肛门、外阴和食管[2,3]。1990年,Band等人曾报告HPV DNA可以使人乳腺上皮细胞永生化,减少它们对生长因子的需要[4]。自1992年后,越来越多的研究通过聚合酶链反应(PCR)在乳腺癌组织中检测到高危险的HPV [5-15]。另一方面,尚无证据表明HPV会感染人体内的乳腺组织,迄今为止也没有报告过HIV/AIDS病人的乳腺内发生HPV感染[16]。此外,众多的研究已经在乳腺癌组织内检测到HPV DNA。这就产生了一个疑问,即HPV是否在乳腺癌中起到了一定的致癌作用。另一方面,人乳头状瘤病毒似乎无法在体外感染正常的乳腺细胞,而对于AIDS病人而言,也没有观测到人类乳腺感染HPV。当前尚无法解释这些具有冲突的观测结果。在乳腺癌的各个致癌阶段,有关HPV感染具有的潜在作用应当通过进一步的试验加以确认。由此,我课题小组结合我科临床取材方面的优势,收集第四军医大学西京医院血管内分泌外科2009.3~2010.3乳腺癌组织标本80例,以及乳腺良性病变组织标本80例。80例乳腺癌患者的年龄为35-75岁的女性,中位年龄55.4岁。其中包括44例浸润性导管癌,20例浸润性小叶癌,9例小叶原位癌,3例单纯癌,2例硬癌,1例髓样癌,1例腺癌。80例乳腺良性病变患者的年龄为25~67岁的女性,中位年龄43.6岁。其中包括乳房纤维腺瘤57例,乳管内乳头状瘤23例。我们参考了国内外众多文献,采用了国际上运用比较广泛的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法,并且同时运用了透射电镜的方法作为验证实验。具体情况如下:1.根据查阅的国内外众多文献,最终选取了目前检出率比较高的HPV 16,以及HPV 18亚型作为目标亚型,收集第四军医大学西京医院血管内分泌外科2009.3~2010.3乳腺癌组织标本80例,以及乳腺良性病变组织标本80例。80例乳腺癌患者的年龄为35-75岁的女性,中位年龄55.4岁。其中包括44例浸润性导管癌,20例浸润性小叶癌,9例小叶原位癌,3例单纯癌,2例硬癌,1例髓样癌,1例腺癌。80例乳腺良性病变患者的年龄为25~67岁的女性,中位年龄43.6岁。其中包括乳房纤维腺瘤57例,乳管内乳头状瘤23例。应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)作为检测方法,同时选择HPV 16以及HPV 18全长质粒作为阳性对照,蒸馏水作为阴性对照。2.仍然是上述所收集的乳腺组织,取肿瘤组织,按照所要求的标准制成标本,送我校直基础部电镜中心观察,摄片。所得出的结论:以上应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并且应用透射电镜实验来作为验证,从而检测乳腺癌组织以及乳腺良性病变组织中是否含有HPV 16,以及HPV 18。试验的结果为:在两种实验中,均未在乳腺癌和(或)乳腺良性病变组织中检测出HPV 16,HPV 18。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-13
前言  13-15
文献回顾  15-30
  1 HPV 的概述  15-17
  2 HPV 相关的癌症和疫苗  17-18
  3 HPV 的感染及其肿瘤发生的过程  18-27
  4 HPV 与乳腺癌关系的进展  27
  5 HPV 检测方法的灵敏度和准确性  27-28
  6 结论和后续工作  28-30
引言  30
1 材料  30-31
2 实验方法  31-35
3 实验结果  35-44
4 实验讨论  44-47
小结  47-49
参考文献  49-66
附录  66-74
个人简历和研究成果  74-75
致谢  75

应用多种方法检测人乳头状瘤病毒与乳腺癌关系的研究

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