学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

酶组化法和生化法在药物安评中的效果比较及盐酸雷诺嗪遗传毒性研究

作　者: 张成梅
导　师: 谢克勤；刘兆平
学　校: 山东大学
专　业: 毒理学
关键词: 肝毒性低分子量褐藻多糖硫酸酯(LMWF) Beagle犬盐酸雷诺嗪(RZ) 小鼠遗传毒性
分类号: R927.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 12次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

药物毒性是导致药物研发失败的主要原因之一。为了避免在药物开发晚期发现毒性导致的昂贵代价,尽早确定药物潜在的毒性问题非常重要。在药物毒性中,以肝和肾毒性最为重要。肝脏是生物转化和解毒的主要场所,也是毒性损伤的易感靶器官之一。据报道,药源性肝病或肝损伤在药物不良反应中占10%-15%。因此药物毒性的早期发现对药物研发就显得至关重要。本课题旨在实验研究基础上,以Beagle犬作为模型,以低分量褐藻多糖硫酸酯(LowMolecular Weight Fucoidan, LMWF)为研究对象,采用不同的检测方法,检测肝脏敏感指标的变化,对毒性早期反应进行判断,分析药物产生毒性的可能性,提高重要脏器敏感指标预测毒性的准确性。1.酶组化法和生化法在药物安评中的效果比较目的观察LMWF对Beagle犬肝脏血清生化及酶组织化学的影响。方法(1)动物分组和给药：取健康Beagle犬16只,♀♂各半,按体重随机分为溶媒对照组(Veh)、LMWF低(L,200 mg/kg/d)、中(M,800 mg/kg/d)、高(H,3000 mg/kg/d)剂量组,每组4只。采用灌胃给药方式,每天上午给药1次,连续给药6d后,停药1 d。按此方式,共计给药13 wk。(2)指标检测：每天进行一般症状观察,每周测定体重1次；检测第一次给药前及末次给药后的动物血清生化指标；末次给药后,取肝脏称重,计算脏器系数；在肝脏相同位置取1cm3大小组织,放入液氮速冻,切片、染色,进行酶组织化学检测；剩余肝脏用4%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋后切片,HE染色,光学显微镜检查。结果(1)一般症状:LMWF各剂量组与Veh组动物于给药前和试验阶段均未出现异常症状,动物活动状态良好,饮食、饮水正常。(2)体重：试验结果表明,在给药期间,LMWF不同剂量组动物的体重与Veh组比较,未见明显改变(P>0.05)。(3)血清生化学检测：给药前和给药结束,LMWF给药各组动物的相关血清生化指标与Veh组比较,无统计学差异(P>0.05)。(4)病理学检测：各给药组动物的肝脏湿重和脏器系数与Veh组比较,未见明显变化(P>0.05)；光学显微镜观察结果显示,各给药组动物肝脏的组织形态并未发现明显病变。(5)肝脏ATPase(adenosine triphosphatase, ATPase)和SDH(Succinate dehydrogenase, SDH)无论是定性观察还是定量分析,3000mg/kg/d给药酶活性下降明显,与Veh组比较,有统计学意义(P<0.05)。结论LMWF给药13 wk,(1)动物一般状况良好,其活动、饮食、饮水和体重增长正常,常规临床检测未见与药物相关的异常变化。(2)酶组织化学检测,LMWF 3000 mg/kg/d给药ATPase和SDH活性明显减弱,说明此剂量给药对肝脏线粒体功能有影响,同时也表明酶组化方法比生化方法敏感。2.盐酸雷诺嗪遗传毒性试验研究目的通过研究盐酸雷诺嗪(Ranolazine, RZ)的遗传毒性,评价其药物安全性。方法采用Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,检测盐酸雷诺嗪的遗传毒性。Ames试验选用两种方法：直接法和代谢活化法。试验菌株为鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型菌株TA97、TA98、TA100和TA102,盐酸雷诺嗪在试验中设6个剂量组((5000、2500、1000、500、250和125μg/皿),同时设自发回复突变对照组和阳性对照组；小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,每项试验设3个盐酸雷诺嗪给药组(222、111和55 mg/kg)、阴性对照组(Veh)及阳性对照组(CP 40 mg/kg。结果盐酸雷诺嗪在<5000μg/皿所测剂量范围内,对TA97、TA98、TA100和TA102四种菌株,加入和不加入S9的各剂量组对四种菌株回变菌落数与阴性对照组差异均无统计学意义(P均>0.05),且无剂量反应关系；盐酸雷诺嗪在55～222mg/kg剂量范围内,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核数及小鼠精子畸变率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸雷诺嗪在所测剂量范围内,未显示遗传毒性作用。

全文目录

中文摘要  6-9
Abstract  9-12
符号说明  12-13
第一部分  13-34
  前言  13-16
  仪器和材料  16-18
  试验方法  18-22
  试验结果  22-30
  讨论  30-33
  结论  33-34
第二部分  34-42
  前言  34
  仪器与材料  34-36
  试验方法  36-37
  试验结果  37-40
  讨论  40-41
  结论  41-42
参考文献  42-46
致谢  46-47
攻读硕士学位期间发表的论文  47-48
学位论文评阅及答辩情况表  48

酶组化法和生化法在药物安评中的效果比较及盐酸雷诺嗪遗传毒性研究

内容摘要

全文目录

相似论文