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光刺激对母鸡间脑c-fos基因表达的影响

作　者: 狄慧
导　师: 胡满
学　校: 河北农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 母鸡间脑 c-fos基因免疫组织化学 Western blot
分类号: S831
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 25次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的:通过对FOS蛋白的检测,来确定由光照刺激引起的c-fos基因在母鸡间脑内的表达,由此来探究光照对鸡生殖性能——即母鸡产蛋量的影响,为进一步了解光照对鸡产蛋的影响机理打下基础。方法:首先,对母鸡进行光照刺激,将母鸡右眼遮光7天后接受201x的光照刺激1.5h,暗适应1.5h。经遮光和光照刺激后,用两种方法检测FOS蛋白:1)免疫组化方法,灌流固定,取脑制作石蜡切片。通过免疫组化方法检测c-fos基因在间脑的表达,确定FOS蛋白出现最多的神经核团:2)蛋白印迹法,对母鸡进行光照刺激后,直接断头,将鸡头在冰上迅速冷却,然后在低温环境下剥离出鸡脑。将剥离出来的鸡大脑用锡纸包好,迅速放于-80℃冰箱中冷冻。将冷冻后的鸡脑捣碎,10000转/秒离心,提取上清液,测出提取液中的蛋白含量,然后用蛋白印迹法来验证提取液中是否含有FOS蛋白,以此来再次验证FOS蛋白在鸡脑中的存在。结果:1)免疫组化结果显示,经DAB显色后Fos样免疫反应阳性物质呈棕黄色颗粒,细胞核与胞浆都有Fos蛋白的表达,但主要位于细胞核内,间脑内有大量Fos样免疫反应阳性神经元,主要见于左侧,分布于圆核(ROT)、室旁核(PVN)、前背外侧核(DLA)、外侧膝状核腹侧部(GLv)和缰核(HB)等核团内,其中ROT、和PVN内免疫反应阳性神经元最多。2)蛋白印迹法(western blot)检测的结果显示,49kD到90kD间有明显特异条带,即FOS蛋白条带,证明在母鸡脑蛋白提取液中有FOS蛋白存在。结论:在这些核团中,Fos样免疫反应阳性神经元多,而且多呈强阳性或阳性,这表明这些核团的神经元在光信息光信息传递中起重要作用。而这些神经核团与鸡生理和生产机能调节又密切相关,以此来推论出,光照通过这些核团接受光刺激从而影响产蛋量的。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1. 引言  8-13
2. 材料与方法  13-20
  2.1 动物  13
  2.2 主要材料与仪器  13-14
    2.2.1 主要试剂及药品  13
    2.2.2 主要仪器设备  13-14
  2.3 实验方法  14-20
    2.3.1 免疫组化试验  14-16
    2.3.2 Western bolt  16-20
3 结果与分析  20-26
  3.1 免疫组化结果  20-25
    3.1.1 Fos蛋白样免疫反应的特点  20
    3.1.2 Fos蛋白样免疫反应阳性神经元在间脑的分布  20-25
    3.1.3 在间脑的各核团中Fos蛋白样免疫反应阳性神经元比率  25
  3.2 Western bolt结果  25-26
4 讨论  26-32
  4.1 间脑对光照的反应  26-30
  4.2 光视觉通路和非视觉感光系统  30
  4.3 FOS蛋白与GnRH  30-32
5. 结论  32-33
参考文献  33-40
在读期间发表的学术论文  40-41
作者简历  41-42
致谢  42

光刺激对母鸡间脑c-fos基因表达的影响

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