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ERα36在中枢神经系统中表达的意义及对PC12细胞凋亡和分化的影响

作　者: 韩丹女
导　师: 邹伟
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 雌激素 ERα36 中枢神经系统 凋亡 分化
分类号: Q42
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 15次
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内容摘要


众所周知,雌激素对中枢神经系统具有保护作用,其作用方式主要通过与胞内雌激素受体(ER)结合,调节基因的转录。经典的雌激素受体主要有ERα和ERβ两类。前者包含三个成员,分别是ERα66,ERα46和ERα36。ERα66主要位于细胞核内,但ER36主要位于胞浆和胞膜上。新近研究发现,ERα36能够介导多种癌细胞膜起始的信号通路的激活,从而影响细胞的增殖。我们实验室前期的研究表明,大鼠脑内有ERα36的表达,但其作用还不清楚。本文我们首先利用Western Blot和免疫细胞荧光的方法继续检测了ERα36在昆明种小鼠脑生后发育不同时期各部位的分布情况和在几种神经细胞的表达与定位。之后利用Hoechst33342染色、流式细胞仪及Western Blot的方法观察了ERα36基因沉默(PC12-ERα36L1)对E2预保护后MPP~+诱导PC12细胞的凋亡情况及对凋亡相关蛋白表达的影响。最后利用本实验室未分化PC12细胞(PC12-unD)为材料,研究ERα36在PC12细胞分化过程中对分化相关蛋白表达的影响。旨在为进一步了解ERα36在中枢神经系统中的作用以及与神经退行性疾病的关系奠定基础。结果如下:(1)几种神经细胞和小鼠脑发育各个时期除间脑外均有ERα36的表达,其中海马、小脑、脑干内的ERα36在生后发育的不同时期表达变化不明显,但在皮层内的表达较多,且随年龄的增加而增加;ERα66和ERα46在海马内的表达模式基本相同(先增高后降低);而在其它组织中,几种雌激素受体的表达有各自的特点。(2)E2预保护1h后,再加入MPP~+作用48h,PC12和PC12-ERα36L1细胞均能抵抗MPP~+诱导的凋亡,且PC12-ERα36L1细胞凋亡情况明显低于PC12细胞。通过检测凋亡相关信号蛋白显示,与对照组相比,在PC12-ERα36L1细胞中,E2+MPP~+组Caspase-3的表达明显降低。(3)利用ERα36 shRNA转染未分化的PC12细胞(PC12-unD),使其基因沉默后发现能够激活胞内NF-κB和P38,降低Nestin表达,增加Tubulin和Neu-n的表达。结论:(1)新型雌激素受体ERα36在神经细胞及中枢神经系统中分布广泛。(2)ERα36参与雌激素对MPP~+诱导凋亡的保护作用;(3)ERα36基因沉默可以影响PC12细胞分化蛋白的表达。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-9
引言  9-10
1 文献综述  10-13
  1.1 膜雌激素受体启动的信号转导通路  10-11
  1.2 膜雌激素受体与Caveolin  11
    1.2.1 Caveolin 在脑中分布及作用  11
    1.2.2 膜雌激素受体与Caveolin 定位关系  11
  1.3 脑内膜雌激素受体与Caveolin 的交互作用  11-12
  1.4 小结  12-13
2 不同ER 亚型在不同日龄小鼠脑内和几种神经细胞中的表达比较及分布特征  13-30
  2.1 材料与方法  13-20
    2.1.1 材料与试剂  13-14
    2.1.2 实验方法  14-20
  2.2 实验结果  20-27
    2.2.1 不同日龄小鼠海马内ER 表达比较  20-21
    2.2.2 不同日龄小鼠皮层内ER 表达比较  21
    2.2.3 不同日龄小鼠小脑内ER 表达比较  21-22
    2.2.4 不同日龄小鼠间脑内ER 表达比较  22-23
    2.2.5 不同日龄小鼠脑干内ER 表达比较  23-24
    2.2.6 ERα36 在几种神经细胞中的表达  24-25
    2.2.7 ERα36 在海马神经元、PC12、U87 和U251 细胞中的定位  25-27
  2.3 讨论  27-29
  2.4 小结  29-30
3 ERα36 在E2 神经保护中的作用及对凋亡相关蛋白表达的影响  30-39
  3.1 材料与方法  31-32
    3.1.1 材料与仪器  31
    3.1.2 实验方法  31-32
  3.2 实验结果  32-36
    3.2.1 ERα36 在雌二醇(E2)保护 MPP~+诱导 PC12 细胞凋亡中的作用  32-33
    3.2.2 ERα36 基因沉默对E2 预保护后MPP~+诱导PC12 细胞凋亡Caspase-3 表达的影响  33-34
    3.2.3 ERα36 基因沉默对E2 预保护后MPP~+诱导PC12 细胞凋亡Bcl-2 表达的影响  34-35
    3.2.4 ERα36 基因沉默对E2 预保护后MPP~+诱导PC12 细胞凋亡Caveolin-1 表达的影响  35-36
  3.3 讨论  36-38
  3.4 小结  38-39
4 ERα36 基因沉默对PC12 细胞神经分化相关蛋白表达的影响  39-46
  4.1 材料与方法  39-41
    4.1.1 材料与试剂  39
    4.1.2 实验方法  39-41
  4.2 实验结果  41-43
    4.2.1 PC12-unD 细胞的特异性分析  41-42
    4.2.2 ERα36 对神经分化相关蛋白定位的影响  42
    4.2.3 ERα36 对PC12 细胞神经分化相关蛋白表达的影响  42-43
  4.3 讨论  43-45
  4.4 小结  45-46
结论  46-47
全文展望  47-48
参考文献  48-54
附录A 缩略词  54-55
攻读硕士学位期间发表学术论文情况  55-56
致谢  56

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中图分类: > 生物科学 > 生理学 > 神经生理学
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