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兔ghrelin组织分布及其基因克隆的研究
作 者: 贾翠平
导 师: 雷治海
学 校: 南京农业大学
专 业: 基础兽医学
关键词: Ghrelin 兔 胃肠道 中枢神经系统 分布定位 基因克隆
分类号: Q78
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
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内容摘要
Ghrelin是Kojima等人于1999年在人和小鼠的胃组织中发现的一种多肽,为生长激素促分泌素(Growth hormone secretagogue)受体(GHS-R)天然的内源性配体,能够促进生长激素(GH)释放,故命名为ghrelin。Ghrelin通过其受体发挥作用,具有促进GH分泌,调节能量平衡,刺激胃酸分泌,调节心血管活动,增强免疫应答,抗细胞增值,影响糖代谢,引起焦虑和改善记忆力,调节睡眠,维持睾丸正常功能等多种生物学作用。在人、鼠、羊、猪和鸡等动物有关ghrelin的研究报道较多,但未见有关兔ghrelin基因克隆和分布定位的报道。本文用免疫组织化学和RT-PCR方法开展了这方面的研究,结果如下:1.用免疫组织化学SP法研究了ghrelin在兔胃肠道内的分布。在胃内,免疫阳性细胞主要位于胃底腺区胃腺的颈部和底部,在贲门腺区和幽门腺区分布较少;在肠道,免疫阳性细胞分布于十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠的粘膜层,在肠腺和肠绒毛上皮分布较多。胃肠道的免疫阳性细胞分为“开放型”和“闭合型”2种,“开放型”细胞呈锥体型,顶部到达腔面;“闭合型”细胞呈圆形或椭圆形,顶部不到达腔面。胃肠道免疫阳性细胞分布密度以胃部最多,从胃到直肠逐渐减少,而“开放型”细胞所占比例沿胃肠道由近及远逐渐升高。2.用免疫组织化学SP法研究了ghrelin在兔中枢神经系统内的定位。结果显示,ghrelin免疫阳性细胞在下丘脑、大脑皮质、迷走神经背侧运动核和脊髓腹侧角内均有分布;在下丘脑分布于弓状核、腹内侧核、室旁核、背内侧核和外侧区。3.用RT-PCR研究了兔ghrelin基因的克隆及其mRNA在体内的表达。从兔胃中提取总RNA,根据Genbank上已发表的猪ghrelin mRNA序列设计合成引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)进行cDNA扩增,获得了目的片段,随后将目的片段克隆于pMD18-T载体上,经大肠杆菌DH 5a转化鉴定正确后进行序列测定,得到326 bp目的片段,经验证分析该序列为兔ghrelin基因的部分片段,并将其登录在Genbank上,基因登录号为EF566009。随后对兔体内ghrelin基因的表达进行了研究,结果显示,ghrelin mRNA在兔大脑、下丘脑、垂体、脑干、脊髓、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、心、肝、脾、肺、肾、睾丸、卵巢和下颌腺等组织器官中均有表达,该结果与在其它动物上获得的结果基本相似,表明ghrelin在进化上是保守的。本文为深入研究ghrelin在兔体内的生理功能奠定了基础。
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全文目录
中文摘要 6-8 英文摘要 8-10 缩略语的中英文对照 10-11 第一篇 文献综述 11-33 第一章 Ghrelin的研究进展 11-33 1 Ghrelin的发现 11-12 2 Ghrelin的结构与分布 12-15 3 Ghrelin的受体结构与分布 15-16 4 Ghrelin的作用机制 16 5 Ghrelin分泌的调节 16-17 6 Ghrelin的生物学效应 17-24 7 Ghrelin的研究和应用前景 24-25 参考文献 25-33 第二篇 实验研究 33-71 第二章 Ghrelin在兔胃肠道内的分布定位 33-45 1 材料与方法 33-34 2 结果 34-41 3 讨论 41-43 参考文献 43-45 第三章 Ghrelin在兔中枢神经系统内的分布定位 45-55 1 材料与方法 45-46 2 结果 46-52 3 讨论 52-54 参考文献 54-55 第四章 兔ghrelin基因的克隆及其在组织中特异性表达的研究 55-71 1 材料与方法 55-62 2 结果 62-66 3 讨论 66-70 参考文献 70-71 全文总结 71-72 攻读硕士学位期间发表的文章 72-73 致谢 73
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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)
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