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荔枝采后果皮抗氧化系统重要酶的活性变化及其基因的差异表达

作　者: 赖建勋
导　师: 金志强
学　校: 华南热带农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 荔枝抗坏血酸过氧化物酶过氧化氢酶谷胱甘肽硫转移酶基因克隆表达分析
分类号: S667.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本研究通过测定荔枝采后不同阶段的抗坏血酸过氧化物酶,过氧化氢酶和谷胱甘肽硫转移酶的活性,以探讨在荔枝采后衰老过程中的抗氧化作用。结果表明在2-3天的储藏时间中,几个抗氧化系统的关键酶活性呈增高的趋势,APX最为活跃。而CAT变化最为平缓。说明抗氧化系统的重要酶参与了荔枝的采后衰老过程,而且不同的酶具有不同的作用。利用RT- PCR方法以及RACE(rapid amplification of cDNA ends)策略从荔枝果皮中扩增克隆到抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate Peroxidase,APX)基因,其cDNA全长1 118 bp,含有645 bp的完整开放阅读框,编码214个氨基酸。采用cDNA芯片随机测序得到过氧化氢酶(Catalase,CAT)基因cDNA全长,长度为1 189 bp,含有876 bp的完整开放阅读框,编码292个氨基酸。谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione S-Transferase,GST)cDNA全长913 bp,含有600 bp的完整开放阅读框,编码200个氨基酸。以及采用同源克隆的方法克隆肌动蛋白(actin)基因片段。采用RT-PCR为分析手段,以actin为内标,初步分析荔枝采后果皮APX、CAT、GST基因在采后不同时期的表达情况,结果显示这些抗氧化酶mRNA丰度逐渐上升高到24小时,又有所下降,说明荔枝采后衰老过程涉及到抗氧化基因的差异表达。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
1 前言  6-16
  1.1 荔枝采后概述  6-8
  1.2 荔枝采后与抗氧化系统  8-14
    1.2.1 抗氧化系统中活性氧及自由基的作用  8-10
    1.2.2 活性氧清除系统  10-14
  1.3 本研究的目的和意义  14-15
  1.4 技术路线  15-16
2 材料与方法  16-22
  2.1 植物材料  16
  2.2 实验试剂  16-17
  2.3 实验仪器  17
  2.4 方法  17-22
    2.4.1 荔枝果皮APX、CAT、GST、actin 基因的克隆  17-19
    2.4.2 APX、CAT、GST 基因的RT-PCR 半定量分析  19-21
    2.4.3 APX、GST、GR、CAT 酶活性测定  21-22
3 结果与分析  22-56
  3.1 APX、GST、GR、CAT 酶活性测定  22-27
    3.1.1 APX 酶活性  22-23
    3.1.2 CAT 酶活性  23-24
    3.1.3 GR 酶活性  24-25
    3.1.4 GST 酶活性  25-26
    3.1.5 膜脂过氧化产物MDA 含量变化  26-27
  3.2 基因克隆和初步表达分析  27-56
    3.2.1 基因克隆  27-52
    3.2.2 以actin 作内标APX、CAT、GST 基因的RT-PCR 半定量分析  52-56
4 讨论与结论  56-59
参考文献  59-64
致谢  64

荔枝采后果皮抗氧化系统重要酶的活性变化及其基因的差异表达

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