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月季再生体系与pBinETR1转化初探

作　者: 郑玉梅
导　师: 刘青林
学　校: 中国农业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 月季 pBinETR1 愈伤组织诱导分化转化
分类号: S685.12
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

为创新抗衰老的切花月季新种质，本文研究了影响月季再生体系建立和pBinETR1转化月季的因素。主要结果如下： (1)影响月季愈伤组织诱导的因素有品种、生长素、外植体、GA、ABA、固化物等，其中品种和生长素是主要因素。‘萨蔓莎’愈伤组织诱导率最高，‘红衣主教’、‘阿班斯’、‘金斯莱克’和‘阿维兰’依次。同一品种的不同外植体诱导愈伤组织效果不同，叶柄形成的愈伤组织色泽和硬度较好，而且同一品种不同外植体有特定适宜的培养基。NAA效果优于2,4-D，适宜的浓度为2mg／L-4mg／L。添加ABA0.2mg／L和GA1.0-2.0mg／L可改善愈伤组织的硬度和色泽。改用gelrite胶有利于愈伤组织的诱导。 (2)影响月季愈伤组织分化的因素有品种、外植体及培养条件，而品种是最主要的因素。‘萨蔓莎’的茎段愈伤组织在MS+BA2.0mg／L+NAA1.0mg／L上有芽状体的分化；叶柄基部在MS+KT0.5mg／L+NAA2.0mg／L生成的愈伤组织，加MS+TDZ0.05-0.1mg／L液体培养基后有分化出叶状体。‘金斯莱克’的叶柄基部愈伤组织在MS+KT0.5mg／L+NAA2.0mg／L分化出芽体以及小植株。‘红衣主教’愈伤组织没有分化。适当的暗培养可生成乳黄色、松散的愈伤组织，有利于分化。 (3)在农杆菌转化试验中，品种和抗生素浓度是主要的影响因素。而不同菌液稀释度、不同共培养时间和不同固化物对月季愈伤组织农杆菌转化的影响不大。‘萨蔓莎’的愈伤组织在选择培养上存活率高于‘金斯莱克’的存活率。Kan的适宜浓度为200-400mg／L，Car的浓度适宜为200-400mg／L。可见，影响pBinETR1转化月季的主要因素是品种。‘萨蔓莎’、‘红衣主教’、‘阿班斯’、‘金斯莱克’和‘阿维兰’均能生成愈伤组织；但只有‘萨蔓莎’和‘金斯莱克’的愈伤组织有芽状体的形成，‘金斯莱克’得到了芽体和再生植株。另外获得了‘萨蔓莎’和‘金斯莱克’的抗性愈伤组织。这些为我们以后的转基因月季工作提供了良好的基础。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-8
缩写  8-9
第一章前言  9-21
  1.1 月季衰老与乙烯  9-13
    1.1.1 乙烯生成合成及信号传导概述  9-10
    1.1.2 月季花朵寿命与乙烯生成量  10-11
    1.1.3 月季花朵寿命与乙烯敏感性  11-12
    1.1.4 乙烯抑制剂对月季开花的影响  12
    1.1.5 月季乙烯相关基因的克隆  12-13
  1.2 月季离体再生  13-17
    1.2.1 直接再生  13
    1.2.2 芽体再生  13-15
    1.2.3 体细胞胚再生  15-17
  1.3 月季基因工程  17-20
    1.3.1 外源基因  17-18
    1.3.2 转化方式  18-19
    1.3.3 转基因植株再生及其检测  19-20
  1.4 抗衰老月季切花种质的创新  20-21
第二章月季再生体系的建立  21-36
  2.1 材料与方法  21-23
    2.1.1 材料  21
    2.1.2 方法  21-23
  2.2 结果与分析  23-34
    2.2.1 影响月季愈伤组织诱导的主要激素  23-25
    2.2.2 生长素、细胞分裂素、外植体及光照条件对月季愈伤组织诱导的影响  25-29
    2.2.3 TDZ、GA、ABA对愈伤组织诱导的影响  29-30
    2.2.4 不同月季品种和月季愈伤组织诱导的关系  30-33
    2.2.5 基本培养基、糖及固化物对月季愈伤组织诱导的影响  33-34
  2.3 讨论与小结  34-36
第三章月季愈伤组织分化  36-44
  3.1 材料与方法  36-37
    3.1.1 材料  36
    3.1.2 方法  36-37
  3.2 结果与分析  37-43
    3.2.1 影响‘萨蔓莎’愈伤组织的分化的因素  37-40
    3.2.2 ‘红衣主教’愈伤细织的分化  40-41
    3.2.3 ‘金斯莱克’愈伤组织的分化  41-43
  3.3 讨论与小结  43-44
第四章 pBinETR1转化月季  44-49
  4.1 材料与方法  44-45
    4.1.1 材料和培养基  44
    4.1.2 转化及方法  44-45
  4.2 试验与结果  45-48
    4.2.1 抗生素对月季农杆菌转化的影响  45-47
    4.2.2 菌液稀释度及共培养时间的差异  47
    4.2.3 不同月季品种对农杆菌转化的影响  47-48
    4.2.4 不同固化物对月季农杆菌转化的影响  48
  4.3 讨论与小结  48-49
第五章总结  49-51
  5.1 品种和外植体  49
  5.2 植物激素与抗生素  49-50
  5.3 培养条件  50
  5.4 几点建议  50-51
参考文献  51-55
致谢  55-56
附录  56-75
  1 微型月季离体培养与快速繁殖  57-63
  2 木本观赏植物离体快速繁殖技术的进展  63-71
  3 月季遗传转化研究进展  71-75
作者简历  75

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