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郑州地区医院病人环孢子虫病流行病学调查及分子遗传特性初步研究

作　者: 曹智高
导　师: 张龙现；朱金凤
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医
关键词: 环孢子虫种类 SSU rRNA ITS-1 PCR
分类号: R181.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 23次
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内容摘要

环孢子虫(Cyclospora)为艾美球虫科(Eimeriidae)环孢子虫属(Cyclospora)成员,在世界范围内流行传播,具广泛宿主。环孢子虫为一种新近发现的肠道寄生原虫,主要寄生于宿主小肠的上皮细胞,可引起宿主食欲减退、体重减轻、持续性腹泻、肠痉挛及其它胃肠炎等临床症状。免疫功能正常者感染环孢子虫后主要引起自限性腹泻,而对于免疫抑制者或免疫功能缺陷者,感染环孢子虫后则可致持续性腹泻甚至死亡。近年来,环孢子虫病受到国内外越来越多研究人员的广泛关注和重视。2008年7月到2010年1月,采用福尔马林-乙酸乙酯沉淀法、饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对河南省郑州地区3家医院的病人进行环孢子虫的感染情况进行调查,共发现环孢子虫感染者29例。用PCR方法对其18Sr RNA基因和ITS-1基因扩增,序列比对结果经系统进化发育分析,所获环孢子虫虫株均属于卡耶塔环孢子虫。本次试验共调查5285名病人,总感染率为0.5%(29/5825)。其中,河南省人民医院、郑州市儿童医院和郑州大学三附院病人环孢子虫感染率分别为0.5%(22/4836)、0.5%(3/608)和1.0%(4/381);春季、夏季、秋季和冬季环孢子虫感染率分别为0.0%(0/823)、1.0%(21/2017)、0.4%(8/1878)和0.0%(0/567),表明环孢子虫感染与季节具有明显相关性(P<0.01);此次调查发现各个年龄段均发现有环孢子虫感染,其中以0~17岁和60岁以上感染率较高,表明环孢子虫感染与年龄具有相关性(P<0.05);男性的环孢子虫感染率为0.6%(19/3154),女性的感染率为0.5%(10/2131) ,表明环孢子虫感染与性别无统计学意义(P>0.05)。100倍光学显微镜下测量50个环孢子虫卵囊,大小为7.5μm×7.5μm。基于18S rRNA基因和ITS-1基因对29个环孢子虫阳性样品进行巢式PCR扩增,对扩增出的29个环孢子虫样品的18S rRNA基因和7个环孢子虫样品的ITS-1基因进行测序,拼接比对后的序列通过NCBI、EMBL和DDBJ三大分子生物学数据库搜索同源序列,然后运用Clustal X1.81、Phylip3.64和DNAstar5.0等分子生物学软件对所获得的序列进行比对分析、构建分子进化树。基于18S rRNA基因位点分析,结果表明29个人源环孢子虫样品与C. cayetanensis进化关系最为接近,仅存在两个碱基差异。而根据在ITS-1基因位点种系进化分析,表明同一地理位置的分离株同源性较高。本研究对河南省郑州地区人源环孢子虫流行状况进行了调查,了解对了人源环孢子虫在河南省的流行情况及特点,并运用分子生物学方法进行了分析,掌握了河南省人源环孢子虫遗传特征及分子特性,为以后人源环孢子虫在全国范围内的研究奠定了基础。

全文目录

致谢  4-6
中文摘要  6-7
第一章文献综述  7-17
第二章郑州市某医院住院病人肠道寄生虫感染情况调查  17-22
  1 引言  17
  2 材料和方法  17-19
  3 结果与分析  19-20
  4 结论与讨论  20-22
第三章河南省郑州地区医院病人卡耶塔环孢子虫病流行病学调查  22-26
  1 引言  22
  2 材料与方法  22-23
  3 结果与分析  23
  4 结论与讨论  23-26
第四章环孢子虫18S基因和ITS-1基因PCR检测方法的建立及其种系发育关系研究  26-38
  1 引言  26
  2 材料与方法  26-29
  3 结果与分析  29-32
  4 结论与讨论  32-38
参考文献  38-44
英文摘要  44-45

郑州地区医院病人环孢子虫病流行病学调查及分子遗传特性初步研究

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