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Wnt/Beta-catenin通路在大鼠孕期胰岛适应性增殖中的作用

作　者: 申红梅
导　师: 刘超
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 妊娠 Wnt/β-catenin通路胰岛β细胞细胞增殖基因芯片催乳素
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:1、研究大鼠妊娠不同阶段胰岛的基因表达谱,分析胰岛Wnt基因在妊娠期的表达差异,筛选出与胰岛增殖相关的Wnt基因。2、探讨Wnt基因在妊娠期大鼠胰岛细胞及体外催乳素作用下INS-1细胞中的表达及意义。方法:1、以胰岛分离纯化技术获得SD大鼠孕10.5天、孕14.5天及正常成年雌鼠的胰岛。2、利用Affymetrix公司生产的高密度寡核苷酸芯片检测大鼠妊娠各阶段胰岛的基因表达谱,分析妊娠各时期芯片结果,筛选出与胰岛增殖相关的Wnt通路基因。3、运用RT-PCR确定胰岛增殖相关Wnt基因的表达情况;运用Western blotting技术验证Wnt通路基因在妊娠不同阶段蛋白水平的表达。4、采用MTT法观察体外催乳素作用下INS-1细胞增殖的变化。5、运用Western blotting技术分析催乳素作用下INS-1细胞中Wnt通路蛋白的表达。结果:1、Affymetrix Rat Genome 230 2.0芯片共包含31099条已知和未知的大鼠基因,正常未孕(N)、孕10.5天(P10.5)、孕14.5天(P14.5)等时期大鼠胰岛基因的检出率分别为45.3%、38.2%、37.2%。与正常未孕对照组相比,大鼠妊娠期Wnt信号通路的基因发生差异表达。2、Wnt/β-catenin基因在孕期表达显著增强。β-catenin、c-Myc mRNA和蛋白表达均明显增加,峰值在孕14.5天。3、体外不同浓度催乳素(50~1000ng/ml)作用24h后,INS-1细胞增殖显著增加,且呈浓度依赖性;INS-1细胞增殖的增加伴随着β-catenin和c-Myc蛋白表达的显著上调。结论:1、Wnt/β-catenin信号转导通路参与孕期胰岛形态结构变化过程。2、大鼠妊娠期Wnt/β-catenin信号通路重要基因的表达发生特异性改变,可能与孕期胰岛的适应性增殖有关。3、Wnt/β-catenin信号通路在催乳素介导的INS-1细胞增殖效应中发挥重要作用。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
引言  8-10
第一节大鼠孕期胰岛Wnt/β-catenin 通路基因表达谱的研究  10-22
  摘要  10-11
  Abstract  11-12
  前言  12
  材料和方法  12-15
  结果  15-18
  讨论  18-20
  参考文献  20-22
第二节 Wnt/β-catenin 信号通路重要基因在大鼠孕期胰岛细胞中的表达  22-34
  摘要  22-23
  Abstract  23-24
  前言  24
  材料和方法  24-27
  结果  27-31
  讨论  31-32
  参考文献  32-34
第三节 Wnt/β-catenin 基因在催乳素作用胰岛 β 细胞中的表达及意义  34-46
  摘要  34-35
  Abstract  35-36
  前言  36-37
  材料和方法  37-39
  结果  39-42
  讨论  42-43
  参考文献  43-46
结论与展望  46-47
文献综述  47-66
  Wnt信号通路与胰岛 β 细胞增殖的关系  47-56
    参考文献  53-56
  一甲状腺激素抵抗综合征伴桥本甲状腺炎家系 TRβ 基因突变析  56-66
    参考文献  64-66
攻读学位期间发表的论文与综述  66-67
致谢  67-68

Wnt/Beta-catenin通路在大鼠孕期胰岛适应性增殖中的作用

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