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不同途径移植细胞治疗缺血性脑损伤的实验研究

作　者: 秦安清
导　师: 刘黎青
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中西医结合基础
关键词: 缺血性脑损伤 骨髓基质干细胞 移植 脑源性神经营养因子 刺五加
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的探讨刺五加诱导后的骨髓基质干细胞(Bone Marrow Stromal Cells, BMSCs)不同途径移植对大鼠缺血性脑损伤的治疗作用的差异。方法贴壁法分离纯化骨髓基质干细胞,经Brdu标记,用刺五加注射液诱导。采用Wistar雄性大鼠,线栓法复制大鼠MCAO模型。造模成功后随机分为对照组10只、细胞尾静脉移植组10只和细胞立体定向移植组10只；另并假手术组10只,共4组。细胞尾静脉移植组及细胞立体定向移植组大鼠在造模后72h分别经尾静脉、立体定向途径移植诱导后骨髓基质干细胞(3×106个／只)。观察大鼠神经功能评分的变化、脑组织形态学变化、尼氏体的变化、缺血侧脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)表达水平和BMSCs的存活情况。结果细胞尾静脉移植组和细胞立体定向移植组大鼠神经行为学、缺血区皮质锥体细胞结构较对照组均明显改善(P<0.05),缺血区脑皮质BDNF阳性表达水平亦明显提高(P<0.05),其中细胞立体定向移植组较细胞尾静脉移植组改善更为明显(P <0.05),Brdu阳性细胞数量更多(P<0.05)。结论刺五加诱导后的骨髓基质干细胞移植能够有效减轻大鼠局灶性脑缺血损伤所引起的神经功能缺损症状,其中立体定向途径移植治疗作用优于尾静脉移植。

全文目录


提要  3-4
Abstract  4-8
引言  8-9
1. 材料和方法  9-14
  1.1 实验动物  9
  1.2 实验试剂  9-11
  1.3 实验仪器  11-12
  1.4 培养用品的清洗和消毒灭菌  12-13
    1.4.1 玻璃器皿的清洗  12
    1.4.2 橡胶制品的清洗  12
    1.4.3 塑料制品的清洗  12
    1.4.4 培养用品的消毒灭菌(高温湿热灭菌法)  12-13
  1.5 实验试剂配制  13-14
    1.5.1 青霉素、链霉素双抗生素溶液的配制  13
    1.5.2 细胞完全培养液的配制  13
    1.5.3 0.4%台盼兰溶液的配制  13
    1.5.4 0.1mg/ml多聚赖氨酸溶液  13
    1.5.5 0.1M磷酸盐缓冲液(PBS)  13
    1.5.6 4%多聚甲醛-0.1M PBS固定液  13
    1.5.7 0.01mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(PH 6.0)  13-14
    1.5.8 苏木素染液配制  14
    1.5.9 伊红配制  14
    1.5.10 胰蛋白酶液的配制  14
2. 实验方法  14-23
  2.1 培养骨髓基质干细胞  14-17
    2.1.1 大鼠BMSCs的分离培养及扩增  14-15
    2.1.2 大鼠原代BMSCs的传代培养  15
    2.1.3 大鼠BMSCs生长曲线的测定  15-16
    2.1.4 台盼兰排斥试验  16
    2.1.5 细胞标记实验  16-17
    2.1.6 细胞标记与诱导  17
  2.2 脑缺血动物模型  17-19
    2.2.1 建立脑缺血动物模型  17
    2.2.2 脑缺血动物模型的评估  17-19
  2.3 动物分组及治疗  19
    2.3.1 动物分组  19
    2.3.2 骨髓基质干细胞的收集  19
    2.3.3 动物治疗方法  19
  2.4 实验取材及处理  19-21
    2.4.1 实验动物取材  20
    2.4.2 石蜡切片的制备  20-21
  2.5 指标检测  21-23
    2.5.1 大鼠神经功能缺损评分  21
    2.5.2 石蜡切片HE染色  21-22
    2.5.3 尼氏小体染色  22
    2.5.4 Brdu阳性细胞的免疫组化  22
    2.5.5 BDNF阳性细胞的免疫组化  22-23
  2.6 统计学处理  23
3. 结果  23-26
  3.1 大鼠神经功能评估结果  23-24
  3.2 HE染色结果  24-25
  3.3 尼氏染色检测结果  25
  3.4 BDNF免疫组化检测结果  25-26
  3.5 Brdu免疫组化检测结果  26
4. 讨论  26-32
  4.1 刺五加的化学成分及药理作用  26-27
  4.2 骨髓基质干细胞与刺五加  27
  4.3 大鼠MCAO动物模型的选择  27-28
  4.4 骨髓基质干细胞标记物的选择  28
  4.5 细胞移植对缺血性脑损伤大鼠神经功能恢复的影响  28-29
  4.6 细胞移植对缺血性脑损伤大鼠组织形态结构变化的影响  29
  4.7 BMSCs移植、BDNF蛋白表达与缺血性脑损伤  29-32
结语  32-33
参考文献  33-36
综述  36-42
  参考文献  40-42
附录  42-48
致谢  48-49
论文著作  49-54
详细摘要  54-60

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学 > 神经病学
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