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自体富血小板血浆对颗粒脂肪移植血运重建的影响

作　者: 宋楠
导　师: 胡刚
学　校: 大连医科大学
专　业: 外科学
关键词: 富血小板血浆脂肪移植微血管计数
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景:自体脂肪移植由于其组织来源丰富、取材简便、操作简单、充盈外形较好、无排斥反应等优点,被临床上广泛应用,是修饰软组织轮廓缺陷的良好填充材料。富血小板血浆(PRP)是自体血通过梯度离心得到的血小板浓缩物,其内血小板含量丰富,能释放丰富的生长因子。很多研究已经证实PRP中的生长因子对软组织和骨的愈合有促进作用,但是目前还没有PRP对脂肪移植后血运重建影响的报道。目的:本实验旨在通过建立裸鼠脂肪移植模型,将兔颗粒脂肪中加入自体富血小板血浆混合移植,来探讨富血小板血浆对颗粒脂肪移植后血运重建的影响。方法:健康新西兰大白兔6只各心脏采血25ml置于预选装有EDTA抗凝剂的试管中,取3ml制备全血血浆,另取2ml用于全血血小板计数,其余20ml制备富血小板血浆。每管10ml置于2个离心管中,2500r/min离心10分钟,吸上清、中间层及红细胞下层1-2mm,移至另一离心管,摇匀。3200 r/min离心8分钟,最下层1ml即为PRP。取PRP0.3ml进行血小板计数,余下移至含有凝血酶及10%氯化钙混合物的管中,4℃冰箱过夜,待血凝块充分收缩后,4500 r/min离心8分钟,取上清,-20℃保存备用。同时无菌条件下取兔颈背部区脂肪垫,浸泡在PBS缓冲液中,清除外包膜、明显的结缔组织和肉眼可见的小血管,用剪刀将脂肪组织剪碎成1mm~3大小,再用生理盐水反复冲洗后置入50ml离心管中静置备用。24只雌雄不限的裸鼠,随机分为4组,每组6只鼠随机排序。每只裸鼠颈背部、背部左右两侧为注射点,三点分别注射①、②或③组脂肪混合物。①实验组:颗粒脂肪0.3ml+明胶海绵125mm~3+PRP0.1ml+生理盐水0.1ml;②实验对照组:颗粒脂肪0.3ml+明胶海绵125mm~3+全血血清0.1ml+生理盐水0.1ml;③空白对照组:颗粒脂肪0.3ml+明胶海绵125mm~3+生理盐水0.2ml。在无菌操作台上,固定裸鼠,消毒后在裸鼠背部标记的三点分别做一长约0.2cm切口,皮下钝性剥离出直径约1.5cm的腔隙,分别填入脂肪组织混合物后缝合切口。术后1、2、4、12周分别处死1、2、3、4组各组6只裸鼠。取出移植物置于体积分数10%多聚甲醛缓冲液中固定,经脱水、透明、石蜡包埋。沿标本纵轴制成4μm厚石蜡切片,每个标本切片5张,一张做HE染色,4张做CD34免疫组化。对全血和PRP进行人工计数,Weidner双盲计数法计算每张组织切片的微血管密度,分析结果。所得数据SPSS16.0统计软件进行统计分析,数据用(x|-)±s表示,并以P﹤0.05为有显著性差异。结果:24只裸鼠均无感染或死亡。全血血小板计数为(380.3±50.6)×10~9/L, PRP血小板计数为(1744.2±599.6)×10~9/L, PRP血小板计数是全血的4.59倍。各个时相的PRP处理组微血管计数均高于全血血清组及生理盐水组,其中1周和2周的差异有显著性差异(P﹤0.05),4周和12周的差异无显著意义(P﹥0.05)。全血血清组与生理盐水组各个时相差异均无显著意义(P﹥0.05)。结论:富血小板血浆在颗粒脂肪移植初期能够促进组织血运重建。

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摘要 6-8Abstract 8-10前言 10-11材料与方法 11-14实验结果 14-19讨论 19-23结论 23-24参考文献 24-27综述 27-37 参考文献 33-37附录 37-38致谢 38

自体富血小板血浆对颗粒脂肪移植血运重建的影响

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