学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

单核细胞增生性李斯特菌p60蛋白在酵母细胞中的表达及其免疫原性研究

作　者: 王俊霞
导　师: 王兴龙
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 单核细胞增生性李斯特菌 p60蛋白毕赤酵母表达免疫原性
分类号: Q789
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 132次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

单核细胞增生性李斯特菌(LM),目前在病原学上已被世界普遍公认为一种人畜共患病和食源性疾病的病原菌,能引起人、畜及禽类的李斯特菌病,表现为脑膜炎、败血症、流产等症状,致死率高达30 %以上,对免疫缺损的病人,致死率甚至高达70 %。该菌分布广泛,对外界环境的抵抗力强。正是由于李斯特菌病的高致病性和该菌的顽强生命力,目前已有许多学者投身到对该菌的检测以及对该病的预防研究工作中。有研究表明由iap基因编码的p60蛋白在对LM的保护性免疫中是一个重要的抗原成分,它是刺激机体B细胞和T细胞产生免疫反应的主要抗原分子。本研究于国内首次对LM iap基因进行了扩增、克隆及表达,并用表达产物p60蛋白免疫Balb/c小鼠,利用间接ELISA实验、淋巴细胞转化实验(MTT法)、T淋巴细胞亚群分类实验对重组蛋白p60的免疫原性做了初步研究。结果,成功构建了酵母表达载体pPICZαA-iap,并将其转入酵母菌GS115,经鉴定确定为阳性重组酵母菌。重组酵母菌经1 %的甲醇诱导6 d,上清经初步纯化浓缩后进行了SDS-PAGE,结果检测到分子量为60 KDa大小的目的蛋白,与预期值相符,经过Western blot检测后表明LM重组蛋白p60在毕赤酵母细胞中进行了有效地转录并实现了分泌性表达,表达量约占酵母培养物上清蛋白总量的23.25%。利用表达产物p60蛋白对小鼠进行了免疫试验,表明重组蛋白p60具有良好的免疫原性,可以刺激小鼠机体产生特异性抗体,能够促进小鼠脾淋巴细胞生长和增殖,具有提高和改善免疫功能,调节免疫应答的作用。本研究为LM的检测及LM亚单位疫苗的研制奠定了良好的基础。

全文目录

内容提要  4-8
前言  8-9
第一篇文献综述  9-21
  第一章单核细胞增生性李斯特菌毒力因子及免疫预防的研究进展  9-15
    1 毒力因子  9-12
    2 免疫预防  12-13
    3 展望  13-15
  第二章单核细胞增生性李斯特菌检测方法研究进展  15-21
    1 实验室检测技术  15-19
    2 现阶段检测单增李斯特菌存在的问题  19-20
    3 展望  20-21
第二篇研究内容  21-70
  实验一单核细胞增生性李斯特菌iap 基因的克隆及真核表达载体的构建  21-35
    1 材料与方法  21-27
    2 结果  27-31
    3 讨论  31-34
    4 小结  34-35
  实验二单核细胞增生性李斯特菌p60 蛋白在酵母细胞中的表达  35-58
    1 材料与方法  35-47
    2 结果  47-53
    3 讨论  53-57
    4 小结  57-58
  实验三表达蛋白p60 的免疫原性研究  58-70
    1 材料与方法  58-61
    2 结果  61-66
    3 讨论  66-69
    4 小结  69-70
结论  70-71
参考文献  71-78
中文摘要  78-80
英文摘要  80-83
致谢  83-84
导师及作者简介  84

单核细胞增生性李斯特菌p60蛋白在酵母细胞中的表达及其免疫原性研究

内容摘要

全文目录

相似论文