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新型抗真菌抗生素SN06的分离纯化研究

作　者: 孙强
导　师: 刘秋
学　校: 中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）
专　业: 生物化学
关键词: 龟裂链霉菌抗真菌活性理化性质分离纯化组分分析
分类号: S482.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 353次
引　用: 3次
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内容摘要

本实验室从东北地区蔬菜保护地土壤中分离到一株放线菌菌株MY02,该菌株发酵液中的抗真菌活性物质SN06,对黄瓜枯萎病、番茄灰霉病等多种植物病原真菌有明显的抑制作用。本文对抗生素SN06的理化性质进行了初步研究,同时采用溶媒萃取、硅胶薄层色谱、硅胶柱色谱及高效液相色谱等方法对其进行了分离纯化,确定分离纯化工艺路线,为进一步的研究奠定基础。本文首先对发酵液中活性物质的理化性质进行了探索,结果表明,其在中性、偏碱性条件下比较稳定,强酸性条件下不稳定;在中性、碱性条件下该抗生素具有较高的热稳定性,酸性条件下,热稳定性较差;通过有机溶剂萃取实验,选择正丁醇为适宜的萃取剂;紫外扫描图谱表明,该抗生素在291nm、304nm、318nm处有指形紫外吸收峰,具备四烯大环内酯类抗生素紫外吸收特征。发酵液经预处理、溶媒萃取等步骤后,采用硅胶柱色谱对活性物质进行分离。首先以硅胶薄层色谱初步筛选分离条件,在此基础上,进一步优化柱色谱条件:先采用氯仿:甲醇(3:1,V/V)洗脱,再用氯仿:甲醇:乙酸乙酯:水(1:7:0.5:0.1,V/V)洗脱,以304nm紫外检测器跟踪检测抗生素SN06,结果取得了较好的分离效果。本文还利用高效液相色谱对柱色谱分离产品进行进一步的分析和纯化,为得到最佳的分离效果,试验对色谱条件进行优化,结果为:采用反相色谱柱Sinochrom ODS-BP-C1(8300mm×4.6mm i. d, 5μm),以甲醇-水系统(80:20,V/V)为流动相,流动相流速为0.4mL﹒min-1,柱温30℃,紫外检测波长304nm。结果表明,抗生素SN06含有两个活性组分,纯度较高,可以满足光谱分析等进一步研究的需要。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-9
第一章文献综述  9-37
  1.1 研究背景及意义  9-10
  1.2 农用抗生素研究概况  10-12
  1.3 多烯类抗生素  12-15
    1.3.1 多烯类抗生素的结构与性质  12-13
    1.3.2 多烯类抗生素的作用机理  13-14
    1.3.3 多烯类抗生素的应用与前景  14-15
  1.4 抗生素的分离纯化  15-27
    1.4.1 经典分离方法  15-18
    1.4.2 吸附法  18-19
    1.4.3 色谱分离法  19-26
    1.4.4 其他现代分离方法  26-27
  1.5 论文研究思路及内容  27-29
  参考文献  29-37
第二章抗真菌抗生素SN06 部分理化性质的研究  37-53
  2.1 引言  37
  2.2 实验材料  37-39
    2.2.1 发酵菌株  37
    2.2.2 供试病原菌  37
    2.2.3 培养基  37-38
    2.2.4 试剂  38
    2.2.5 实验仪器  38-39
  2.3 实验方法  39-42
    2.3.1 菌种发酵培养  39
    2.3.2 发酵液预处理  39
    2.3.3 抑菌活性测定  39-40
    2.3.4 发酵上清液抑菌活性的pH稳定性  40
    2.3.5 发酵上清液活性物质的热稳定性  40
    2.3.6 有机溶剂对发酵液活性物质的萃取实验  40-42
    2.3.7 紫外吸收光谱  42
  2.4 结果与讨论  42-50
    2.4.1 不同pH对发酵上清液抑菌活性的影响  42-43
    2.4.2 发酵上清液活性物质的热稳定性  43-46
    2.4.3 发酵上清液活性物质的萃取实验  46-49
    2.4.4 紫外吸收光谱  49-50
  2.5 本章小结  50-51
  参考文献  51-53
第三章抗真菌抗生素SN06 的分离纯化  53-77
  3.1 引言  53
  3.2 材料与方法  53-58
    3.2.1 实验材料  53-54
    3.2.2 实验方法  54-58
  3.3 结果与讨论  58-74
    3.3.1 粗分离  58-59
    3.3.2 硅胶薄层色谱  59-64
    3.3.3 硅胶柱色谱  64-67
    3.3.4 高效液相色谱（HPLC）  67-74
  3.4 本章小结  74-75
  参考文献  75-77
第四章总结  77-80
  4.1 结论  77-78
  4.2 讨论与展望  78-80
作者简介及发表论文  80-81
致谢  81

新型抗真菌抗生素SN06的分离纯化研究

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