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猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因重组犬腺病毒2型活载体疫苗的基础研究

作　者: 胡志敏
导　师: 才学鹏；岳城
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪带绦虫 TSOL18基因 犬腺病毒2型 重组活载体疫苗
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


囊虫病(Cysticercosis Cellulosae)是由猪带绦虫(Taenia solium)的幼虫寄生于人或猪体内而引起的一种重要人畜共患寄生虫病。人不仅是中间宿主，而且是唯一的终末宿主。腺病毒载体是基因工程疫苗研究中重要的转基因病毒载体，研究和开发基于腺病毒的重组猪囊尾蚴疫苗，将对控制或根除猪囊尾蚴病具有实践意义。 以质粒pVAX1为载体构建了猪囊虫病基因免疫用的真核表达质粒。首先根据kozak原理设计了1对表达引物，用PCR方法从构建好的重组质粒pGEM-TSOL18中扩增出猪带绦虫六钩蚴TSOL18基因片段，将其定向克隆到质粒pVAX1中得到真核表达质粒pV-TSOL18。再根据PCR点突变原理设计4条突变引物，对目的基因进行改造，之后亚克隆入pVAX1载体中获得含改造后的目的基因的重组表达质粒pV-TSOL18m。经脂质体介导法转染BHK-21细胞36h后用RT-PCR方法检测到了目的基因的转录。这为猪囊虫病基因疫苗动物免疫实验研究奠定了良好基础。 构建了能表达猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白的重组犬2型腺病毒CAV2-TSOL18m。首先用Ssp I对重组质粒pVAXE3的E3区中859bp长度的片段进行缺失，得到含有CAV-2 E3区的穿梭质粒pVAX△E3。将所构建的真核表达质粒pV-TSOL18m用Nde I+Sph I双酶切，然后将含有TSOL18m基因的完整表达盒(pCMV-TSOL18m-PolyA)进一步定向克隆到pVAX△E3中，构建出p△E3-TSOL18m。通过Nru I+Sal I双酶切p△E3-TSOL18m，回收含有目的基因TSOL18m的表达盒将其克隆入含有犬腺病毒2型全基因组的骨架质粒pPoly2-CAV2中，获得重组质粒pCAV2-TSOL18m。Asc I+Cla I双酶切pCAV2-TSOL18m释放重组基因组，转染DK细胞，获得了重组病毒CAV2-TSOL18m。该重组病毒在DK细胞上能产生典型的腺病毒细胞病变。RT-PCR检测表明，该重组病毒能转录出TSOL18m基因mRNA。

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 血清学
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