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检测弓形虫的PCR-ELISA方法的建立和应用

作　者: 李健
导　师: 刘佩梅；杨秀珍
学　校: 天津医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 弓形虫 PCR-ELISA 地高辛标记探针 PCR ELISA
分类号: R446.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的:建立快速、敏感、特异、稳定的PER-ELISA方法,并用其检测感染动物体内的弓形虫。方法:将生物素标记的PCR产物与地高辛标记的特异性探针杂交,再通过显色反应测出OD值,以判断弓形虫感染情况。优化杂交时间、探针浓度等反应条件,确定最佳反应条件。测定该方法的敏感性,并与琼脂糖凝胶电泳结果比较。以人血淋巴细胞、小鼠血淋巴细胞、疟原虫、旋毛虫等DNA为模板在同样条件下进行测试,以确定该方法的特异性。通过对不同样本在同一时间内的重复测试和同一样本在不同时间内的重复测试来确定该方法的稳定性。再分别以10~4、10~3弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠,取全血、肝组织用PER-ELISA检测小鼠感染情况,取血清用ELISA检测IgM,并对两种方法的检测结果进行比较。结果:本实验的最佳杂交时间为30 min,最佳探针浓度为3 pmol/ml。该方法的最低检测阈值为20 fg弓形虫DNA,其灵敏度是电泳法的10倍,并且与人血淋巴细胞、小鼠血淋巴细胞、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。经一致性检验,两种重复测试的Alpha值分别为0.74和0.72,表明该方法稳定性良好。检测感染动物肝组织及全血标本,10~4、10~3组分别在感染后第二天、第三天即可测出阳性。10~4组肝组织和全血标本的阳性检出率分别为93.3%(14/15)和86.7%(13/15);10~3组肝组织和全血标本的阳性检出率分别为90.5%(19/21)和81.0%(17/21),两种标本的阳性检出率无统计学差异(P>0.05)。用ELISA检测血清IgM,10~4组第6 d显示出阳性,10~3组第8d才显示出阳性,两组的阳性检出率分别为13.3%(2/15)和9.5%

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-21
结果  21-40
讨论  40-44
结论  44-46
参考文献  46-50
致谢  50

检测弓形虫的PCR-ELISA方法的建立和应用

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