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传染性支气管炎病毒地方分离株的RFLP和序列分析

作　者: 王宪文
导　师: 王泽霖
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 传染性支气管炎病毒 RT-PCR 限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP) 点突变同源性分析
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

用扩增片段为0.2kb、0.6kb、1.7kb的三对引物分别对传染性支气管炎病毒6株标准株：M₄₁、Holte、Arka、Conn、Gray、T和8株地方分离株：宜、138、广32、云、S_AIBV14呼、Am、J₇、张IBV进行RT-PCR，结果以0.6kb片段引物扩出的毒株最多：6株标准株中的5株：M₄₁、Arka、Conn、Gray、T；8株地方分离株中的6株：广32株、J₇株、张IBV株、Am株、宜株、138株。0.2kb片段长度的引物可扩增出2株标准株：M₄₁株和Connecticut株和2株地方分离株：S_AIBV14#呼和Am株；而1.7kb长度片段的引物只扩增出了标准株M₄₁和地方分离株138株。取各毒株0.6kb片段PCR产物，分别用三种限制性内切酶AluⅠ、TaqⅠ和AfaⅠ进行酶切，然后根据标准株的酶切模式对各地方分离株进行RFLP分型（AfaⅠ酶切均为阳性），可将参考株分为如下三种模型①M₄₁模式：AluⅠ酶切、TaqⅠ酶切均有特异的条带；②Ark株、G株、C株模式：AluⅠ酶切阳性而TaqⅠ酶切阴性；③T株模式：AluⅠ酶切阴性而TaqⅠ酶切阳性。然后根据标准株的酶切模式对各地方分离株进行RFLP分型，可将各地方分离株分为①M₄₁模式有：广32株、J₇株、张IBV株、Am株②Ark株、G株、C株模式有138株、宜株。这表明我国IBV血清型众多，但以M₄₁为代表的呼吸型传支占比例最大（50％），宜株为代表的肾型传支也有一定数量（25％）。将地方分离株宜株的0.6kb片段的扩增产物进行测序并与标准株Ark株、G株、C株和标准株M₄₁的相应序列进行分析比较，认为该地方分离株是以点突变为主并可能伴有基因插入、基因缺失和基因重组的新的IBV变异株，氨基酸同源性的分析显示三株呼吸性毒株M₄₁、H₅₂、H₁₂₀同源性极高分别为95.8％、97％、98.8％；宜毒株与同一酶切类型的Ark株、G株、 C株的同源性分别为91．6％、SS％、85％，其中与Ark－1529－29株氨基酸同源性最高，为 gi．6见与不同酶切类型的 M。l、、H。卜 H；。。三毒株氨基酸同源性较低分别为85．6巩86．2卧86．2趴因而推测宜株是由 Ark、《9型株变异而来。本研究对IBV的快速诊断和分型有较大的实用价值，可为IBV的防制和地方制苗株的选择提供参考依据。

全文目录

中文摘要  5-7
文献综述  7-26
前言  26-28
材料与方法  28-32
结果  32-43
讨论  43-51
参考文献  51-60
英文摘要  60-62
附录  62

传染性支气管炎病毒地方分离株的RFLP和序列分析

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