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PMS肝气郁证大鼠含药血清对原代海马神经元ERβ信号通路相关蛋白表达水平的影响

作　者: 王凤
导　师: 张惠云
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 经前期综合征 肝气郁证 海马神经元 雌激素受体 经前舒颗粒 含药血清
分类号: R271.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：观察PMS大鼠血清和含经前舒血清对体外培养的新生大鼠原代海马神经元细胞活力和ERβ及相关蛋白表达的影响情况,探讨PMS肝气郁证发病的微观机制,并明确中药复方制剂经前舒颗粒的相应作用靶点。方法：采用阴道细胞涂片法确定大鼠动情周期：接收期与非接收期,以非接受期大鼠造模,通过旷场实验评价模型。采用慢性应激束缚法制备PMS肝气郁证大鼠模型,以调肝方药经前舒颗粒进行药物干预；制备正常组、PMS肝郁模型组和PMS肝郁给药组大鼠血清,分别加入体外培养新生大鼠海马神经元的培养基中,MTT法测定神经元细胞活力；用蛋白质印迹技术(western blot)检测含药血清干预的海马神经元中ERβ、5-HTR1A受体(5-HTP1A)、MAOA、MAOB、5-HTT受体蛋白水平表达量。结果：与正常组相比,PMS肝郁模型组大鼠体重显著降低(P<0.05)；造模后,旷场实验的水平得分、垂直得分及总分均显著减少(P<0.05)；与PMS肝郁模型组相比,PMS肝郁给药组大鼠体重显著增加(P<0.05),旷场水平得分、垂直得分及总分均显著增加(P<0.05)。MTT试验表明,经前舒含药血清能显著提高海马神经元的活力。蛋白印迹实验表明,与正常组大鼠相比,肝郁模型组大鼠血清使海马神经元细胞ERβ、MAOA表达水平显著升高(P<0.05),5-HTR1A、5-HTT表达水平显著降低(P<0.05)；与肝郁模型组比较,肝郁给药组血清使ERβ、MAOA表达水平显著降低,5-HTR1A、5-HTT表达水平显著上调(P<0.05); MAOB的蛋白表达组间差别无统计学意义。结论：用慢性应激束缚法可有效制备PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验可有效评价该模型。大鼠海马的ERp表达与PMS肝气郁证关系密切,海马的ERβ、5-HTR1A、MAOA、5-HTT的表达变化可能是导致PMS肝气郁证的重要病因之一。经前舒颗粒含药血清对大鼠海马原代神经细胞以上几种蛋白的表达有不同程度的调节作用,表明海马神经元中的上述蛋白可能是经前舒的作用靶点。

全文目录


提要  3-4
Abstract  4-9
引言  9-11
材料与方法  11-21
  1 实验材料  11-13
    1.1 实验动物  11
    1.2 实验试剂和药物  11-12
      1.2.1 细胞培养试剂  11
      1.2.2 Western blot试剂  11-12
      1.2.3 试验药物  12
    1.3 实验仪器  12
      1.3.1 细胞培养仪器  12
      1.3.2 Western blot仪器  12
      1.3.3 造模仪器  12
    1.4 实验溶液  12-13
      1.4.1 Western blot溶液  12-13
    1.2 细胞培养溶液  13
  2 实验步骤及方法  13-21
    2.1 含药血清制备  13-15
      2.1.1 动物筛选  13
      2.1.2 慢性应激束缚法造模给药  13-14
      2.1.3 旷场试验  14
      2.1.4 制备血清  14-15
    2.2 海马原代神经元体外培养  15-16
      2.2.1 新生大鼠海马原代神经细胞培养  15
      2.2.2 MTT测定细胞相对活力  15-16
    2.3 ERβ、5-HTR1A、MAOA、MAOB、5-HTT蛋白表达水平检测  16-20
      2.3.1 总蛋白的提取  16
      2.3.2 样品蛋白含量的测定  16-17
      2.3.3 SDS-PAGE电泳  17-18
      2.3.4 电转移  18-19
      2.3.5 免疫反应  19-20
      2.3.6 抗体稀释比例  20
      2.3.7 显影与图像分析  20
    2.4 统计方法  20-21
结果  21-28
  1 行为学测试结果  21-23
    1.1 各组大鼠体重称量结果  21-22
    1.2 各组大鼠旷场实验得分  22-23
  2. MTT测定细胞相对活力  23-24
  3 ERβ、5-HTRlA、MAOA、MAOB、5-HTT表达水平检测结果  24-28
    3.1 经前舒颗粒含药血清对原代培养大鼠海马神经元ERβ受体蛋白表达量影响  24-25
    3.2 经前舒颗粒含药血清对原代培养大鼠海马神经元5-HTR1A受体蛋白表达量影响  25-26
    3.3 经前舒颗粒含药血清对原代培养大鼠海马神经元MAOA受体蛋白表达量影响  26-27
    3.4 经前舒颗粒含药血清对原代培养大鼠海马神经元5-HTT蛋白表达量影响  27-28
讨论  28-42
  一、PMS肝气郁证发病机制  28-29
  二、海马神经元与PMS肝气郁证  29-31
    2.1. 海马神经元与抑郁情绪的相关性  29-30
    2.2 抗抑郁药促进海马神经元生长的分子机制  30-31
  三、5-HT系统与PMS  31-36
    3.1 5-HT系统与5-HTR1A受体  31-34
    3.2 5-HTT对5-HT的摄取  34-35
    3.3 MAOA对5-HT的降解代谢  35-36
  四、ERβ与5-HTR1A,MAOA,5-HTT的相互作用及PMS肝气郁证信号通路初步推断  36-38
    4.1 ERβ与5-HTR1A,MAOA,5-HTT的相互作用  36-37
    4.2 ERβ及其相关蛋白信号通路受体在PMS肝气郁证中的作用机制初步推断  37-38
  五、肝气郁证动物模型研究现状  38-40
    5.1. 常用肝气郁证动物模型及模型建立依据  38-39
    5.2 肝气郁证大鼠模型的建立及评价  39-40
  六 经前舒颗粒的有效成分及与ERβ信号通路靶点相关性  40-41
  七、问题与展望  41-42
结语  42-43
参考文献  43-49
附录  49-56
综述  56-61
  参考文献  59-61
致谢  61-62
论文著作  62-69
硕士学位论文摘要  69-74

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