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经前舒颗粒对郁怒大鼠不同脑区5-HTR3B表达和5-HT含量的影响

作　者: 李红华
导　师: 薛玲
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 郁怒 经前舒颗粒 五羟色胺3B受体 RT-PCR western-blot
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:通过复制大鼠郁怒情绪模型,并以调肝中药经前舒颗粒进行干预,分析郁怒状态下下丘脑、海马、顶区皮质、额区皮质中5-HTR3B的表达变化及5-HT含量的改变,探讨郁怒情绪的微观机制,并进一步探讨调肝方药经前舒颗粒的干预作用机制,为经前舒颗粒调肝解郁的机制提供新的理论依据。方法:采用社会隔离加居住入侵方法制备郁怒情绪大鼠模型,以调肝方药经前舒颗粒进行药物干预。通过旷场实验、糖水偏好实验对大鼠模型进行评价。对大鼠进行社会隔离实验后行居住入侵实验5天后,依据中位数统计法分出愤怒组和郁怒组大鼠,并将郁怒组大鼠随机分为郁怒模型组和郁怒给药组,郁怒模型组大鼠在造模的同时灌胃给予灭菌饮用水,郁怒给药组大鼠在造模的同时灌胃给予经前舒颗粒,并设正常对照组。两周后大鼠断头取材,与冰上迅速分离海马、下丘脑、额区皮质、顶区皮质,运用RT-PCR、western-blot检测各脑区的5-HTR3B的表达,运用HPLC-FLU检测各脑区的5-HT的含量的变化。结果:行为学评价结果旷场实验发现,造模一周后郁怒模型组得分显著高于正常对照组(P<0.01);糖水偏好实验发现,郁怒模型组糖水偏好系数与正常对照组比较显著降低(P<0.01)。而用药一周后,发现郁怒给药组旷场实验得分与郁怒模型组比较显著降低(P<0.05),而与正常对照组比较则无显著性差异(P>0.05);糖水偏好实验发现,郁怒给药组糖水偏好系数与郁怒模型组比较有显著升高(P<0.05),与正常对照组比较则无显著差异(P>0.05)。RT-PCR和Western-blot结果:郁怒模型组大鼠下丘脑、海马、顶区皮质、额区皮质5-HTR3B的mRNA水平和蛋白表达水平较正常对照组都显著的升高(P<0.01);郁怒给药组这四个脑区5-HTR3B的mRNA水平和蛋白表达水平较模型组有显著的下降(P<0.01),与正常组比较则无显著性差异(P>0.05)。高效液相-荧光检测法结果:郁怒模型组大鼠下丘脑、额区皮质、海马、顶区皮质5-HT含量与正常组比较有显著降低(P<0.01)。郁怒给药组大鼠下丘脑、额区皮质、海马、顶区皮质5-HT含量与郁怒模型组比较有显著的升高(P<0.01),与正常对照组比较这四个脑区5-HT含量则无显著性差异(P>0.05)。结论:用社会隔离加居住入侵方法可有效的制备郁怒情绪大鼠模型,旷场实验和糖水偏好实验对动物模型可作出有效的评价。大鼠不同脑区内5-HT含量变化和5-HT3B受体的表达变化与郁怒情绪密切相关。顶区皮质、额区皮质、海马、下丘脑中5-HT含量的降低和5-HT3B受体表达的升高可能是郁怒情绪的重要的微观机制之一,调肝方药经前舒颗粒调肝解郁的作用则可能与调节不同脑区5-HTR3B的表达及5-HT的含量密切相关。

全文目录


提要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-12
材料与方法  12-36
  1 实验材料  12-13
    1.1 实验动物  12
    1.2 药品与试剂  12
    1.3 实验仪器  12-13
  2 实验步骤与方法  13-28
    2.1 模型的制备  13-15
      2.1.1 大鼠的筛选及饲养  13
      2.1.2 实验动物的分组与给药方法  13-14
      2.1.3 应激实验  14
      2.1.4 行为学指标数据的采集与取材  14
      2.1.5 行为学评价  14-15
    2.2 RT-PCR 检测大鼠不同脑区5-HT38 的基因表达  15-18
      2.2.1 大鼠脑组织总RNA 抽提  15-16
      2.2.2 RNA 反转录  16-17
      2.2.3 PCR 扩增  17
      2.2.4 琼脂糖凝胶电泳  17
      2.2.5 检测  17-18
    2.3 western-blot 检测不同脑区5-HTR38 蛋白表达  18-26
      2.3.1 溶液的配制  18-22
      2.3.2 总蛋白的提取与浓度的测定  22-23
      2.3.3 western-blot 检测相应蛋白表达  23-26
    2.4 高效液相-荧光法检测大鼠不同脑区5-HT 含量  26-28
      2.4.1 标准储备液的制备  26
      2.4.2 色谱条件选择  26-27
      2.4.3 标准曲线  27
        2.4.3.1 标准液的制备  27
        2.4.3.2 线性关系考察  27
      2.4.4 精密度分析  27
      2.4.5 回收试验  27-28
      2.4.6 样品的处理与检测  28
  3 数据处理  28
  4 实验结果  28-36
    4.1 行为学指标结果  28-30
      4.1.1 旷场实验结果  28-29
      4.1.2 糖水偏好实验结果  29-30
    4.2 RT-PCR 实验结果  30-32
    4.3 Western-blot 结果  32-34
      4.3.1 检测图  32-33
      4.3.2 不同脑区5-HT3B 蛋白表达量结果  33-34
    4.4 高效液相-荧光检测法结果  34-36
讨论  36-44
  1. 5-HT 系统与情绪  36-40
    1.1 与情志相关的脑区  36-37
    1.2 5-HT 及其受体与情绪  37-39
    1.3 5-HT受体与GABA  39-40
  2 对郁怒的认识  40-41
    2.1 中医对郁怒的认识  40
    2.2 现代医学对郁怒的认识  40-41
  3 经前舒颗粒对郁怒情绪的影响  41-43
  4 问题及展望  43-44
结语  44-45
参考文献  45-52
综述  52-64
  1 5-HT 受体的分型分布  52-54
  2 5-HT 受体的功能  54-59
    2.1 与睡眠的关系  54-55
    2.2 与消化系统的关系  55
    2.3 与情感认知等的关系  55-56
    2.4 在偏头痛中的研究  56-57
    2.5 与呼吸系统的关系  57-58
    2.6 与免疫系统的关系  58
    2.7 5-HT与心血管疾病的关系  58-59
  3 问题与展望  59
  参考文献  59-64
附录  64-65
致谢  65-67
论文著作  67-77
详细摘要  77-81

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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