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阳和汤体外对成骨细胞的增殖作用及对破骨细胞的分化影响

作　者: 王云丹
导　师: 黄立中
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西结合临床
关键词: 阳和汤 含药血清 成骨细胞 UMR106 破骨细胞 RAW264.7
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的探讨阳和汤大鼠含药血清对成骨细胞及破骨细胞的作用,为临床应用阳和汤治疗骨转移瘤提供理论依据,同时也为中医温阳抗癌提供理论依据。方法1.取SD大鼠20只,分为对照组、阳和汤高、中、低剂量四个组,分别用高(生药含量约1.6g/ml)、中(0.56g/ml)、低(0.18g/ml)剂量阳和汤药给SD大鼠灌胃,对照组灌同等剂量蒸馏水,制备高、中、低剂量阳和汤含药血清及对照组空白血清。2.分离大鼠成骨细胞,传代培养细胞株UMR106、RAW264.7,诱导因子M-CSF和RANK-L诱导RAW264.7分化形成破骨细胞。3.MTT法检测经不同含药血清作用后成骨细胞、成骨细胞株、及破骨前体细胞株的增殖情况,以及破骨细胞(TRAP)酶活性测定。取原代成骨细胞,成骨细胞株UMR106,破骨前体细胞RAW264.7接种到培养板中,加入不同含药血清,分别检测不同浓度含药血清组24h、48h、72h时间段细胞的OD值。诱导因子M-CSF和RANK-L诱导RAW264.7分化形成破骨细胞的过程中,加入不同含药血清,在诱导的第4、5、6天,逐日进行TRAP酶活性测定。结果1.成功获取含药血清,并将其作用原代成骨细胞、细胞株UMR106、细胞株RAW264.7及诱导过程中的破骨细胞。2.成功分离培养原代成骨细胞,传代培养细胞株UMR106、RAW264.7,诱导出破骨细胞。3.MTT法发现,OD值与含药血清浓度有关,还与作用时间有关。阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在24h、48h、72h都能够明显提高原代成骨细胞OD值,低剂量组在48h、72h也能明显提高细胞的OD值,与空白组比较差异有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)；阳和汤低、中、高剂量组在24h、48h、72h均能显著提高细胞株UMR106的OD值,与空白组比较差异有显著统计学意义(P<0.01或P<0.05)；阳和汤低、中、高剂量组对破骨前体细胞RAW264.7的OD值表现出降低趋势,是在整体上升的趋势下略有降低,说明细胞并未死亡,表现出轻微的抑制作用,但与空白组比较差异无显著性(P>0.05)；阳和汤高、中、低剂量组对诱导破骨细胞的过程中TRAP酶活性的测定也无统计学意义(P>0.05),其表明阳和汤含药血清在体外可能无明显抑制破骨细胞生成的作用。结论根据原代成骨细胞,细胞株UMR106和细胞株RAW264.7增殖的测定,以及破骨细胞TRAP酶活的测定结果,显示了阳和汤含药血清对成骨细胞的增殖具有显著促进作用,但对破骨前体细胞的抑制作用无统计学差异,同时对阻碍破骨前体细胞向破骨细胞分化的过程未见有统计学差异。

全文目录


缩略语  6-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-12
引言  12-13
第一部分 阳和汤含药血清的制备  13-18
  1 材料  13-14
    1.1 实验动物  13
    1.2 实验药物  13-14
    1.3 实验器材  14
  2 方法  14-15
    2.1 实验动物及灌胃  14
    2.2 提取血清  14-15
  3 技术探讨  15-18
第二部分 细胞培养  18-27
  1 材料  18-21
    1.1 实验动物  18
    1.2 实验细胞  18
    1.3 主要试剂  18-19
    1.4 主要仪器  19
    1.5 试剂配制  19-21
  2 方法  21-23
    2.1 原代成骨细胞  21
    2.2 骨肉瘤细胞株UMR106  21-22
    2.3 UMR106传代培养  22
    2.4 小鼠巨噬细胞株RAW264.7  22
    2.5 破骨细胞的诱导获得  22-23
  3 结果  23-24
    3.1 倒置显微镜观察细胞生长形态  23-24
    3.2 破骨细胞的鉴定  24
  4 技术探论  24-27
    4.1 大鼠成骨肉瘤细胞株UMR106  24
    4.2 破骨细胞的诱导培养技术要点  24-27
第三部分 阳和汤含药血清对体外培养成骨细胞及破骨细胞的影响  27-37
  1 材料  27-28
    1.1 实验药物  27
    1.2 主要试剂  27-28
    1.3 主要仪器  28
    1.4 试剂配制  28
  2 方法  28-30
    2.1 细胞增殖实验  28-29
    2.2 杭酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的活性测定  29-30
    2.3 统计学处理  30
  3 实验结果  30-35
    3.1 阳和汤含药血清对原代成骨细胞及细胞株UMR106细胞增殖的影响  30-32
    3.2 阳和汤含药血清对破骨前体细胞株RAW264.7增殖的影响  32-33
    3.3 阳和汤含药血清对破骨细胞分化和形成的影响  33-35
  4. 小结  35
  5 技术探讨  35-37
第四部分 讨论  37-41
  1 西医治疗骨转移癌  37-38
  2 中医对骨转移瘤的认识  38-39
  3 温阳散寒法治疗骨转移瘤的机制探讨  39-41
第五部分 研究总结  41-42
致谢  42-43
参考文献  43-46
附录1 试验图片  46-47
附录2 文献综述  47-54
  参考文献  52-54
附录3 攻读硕士学位期间公开发表的学术论文  54

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