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雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响

作　者: 庞磊
导　师: 张跃蓉
学　校: 遵义医学院
专　业: 口腔基础医学
关键词: 髁突软骨软骨细胞雌激素受体人胚
分类号: R782.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：①初步查明雌激素受体、Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的分布情况；②探求最佳的人胚髁突软骨细胞体外分离培养方法,以期获得高活性的软骨细胞为后续实验提供载体工具。③观察雌激素对髁突软骨细胞增殖与分化的影响。方法：①采用HE染色、免疫组织化学染色法检测雌激素受体α、β及Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨各层的表达情况。②采用机械分离及改良两步酶消化法体外培养髁突软骨细胞,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定软骨细胞,并观察其形态学结构,描绘生长曲线,以建立人胚髁突软骨细胞体外培养体系,为实验提供应用细胞。③MTT法检测不同浓度雌激素(10-6mol/L、10-8mol/L、10-10mol/L、10-12mol/L、0mol/L)对体外分离培养的人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响。结果：①雌激素受体ERα、ERβ在人胚颞下颌关节髁突软骨的纤维层及增殖层几乎未见表达；ERα主要表达于髁突软骨的过渡层、肥大层,钙化软骨层中有少量表达；ERβ集中表达于肥大层,钙化软骨层中表达较少；ERα、ERβ在细胞质、细胞核内均有表达,ERα在细胞内分布均匀,而ERβ集中表达于细胞核内。②Ⅱ型胶原主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层,而纤维层、增殖层未见表达,钙化软骨层中有少量表达。③软骨细胞体外培养早期(1～3代)以三角形、多角形为主,细胞核呈圆形、椭圆形,可见1～2个核仁,大小均一；细胞呈铺路石样生长；培养至第4代后梭形细胞增多,伪足较长,开始呈漩涡状生长。甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性,证明培养的细胞为软骨细胞。④高浓度(10-6mol/L)、低浓度(10-12mol/L)雌二醇抑制软骨细胞增殖,生理浓度(10-10mol/L～10-8mol/L)雌二醇促进软骨细胞增殖,且随着作用时间的延长,促进或抑制作用增强。结论：①ERα、ERβ以及Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨呈差异性表达。②机械分离及两步酶消化法可获取均一、高增殖活性的髁突软骨细胞。③雌激素对髁突软骨细胞增殖分化具有双向调节作用,并呈时间和剂量依赖性。

全文目录

英文缩略词表  7-9
中文摘要  9-10
Abstract  10-12
前言  12-14
第一部分人胚髁突软骨雌激素受体表达的初步研究  14-22
  1 实验目的  14
  2 实验材料  14-15
  3 实验方法和步骤  15-16
    3.1 切片制作  15
    3.2 人胚髁突软骨HE染色  15
    3.3 人胚髁突软骨ER免疫组织化学染色  15-16
    3.4 人胚髁突软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色  16
  4 实验结果  16-20
    4.1 人胚髁突软骨解剖形态观察  16-17
    4.2 人胚髁突软骨HE染色观察  17-18
    4.3 人胚髁突软骨ERα、ERβ免疫组织化学染色观察  18-19
    4.4 人胚髁突软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察  19-20
  5 讨论  20-21
  6 小结  21-22
第二部分人胚髁突软骨细胞的分离与培养  22-33
  1 实验目的  22
  2 实验材料  22-24
  3 实验方法和步骤  24-26
    3.1 人胚髁突软骨细胞的分离与原代培养  24
    3.2 人胚髁突软骨细胞的纯化  24
    3.3 人胚髁突软骨细胞的传代培养  24-25
    3.4 人胚髁突软骨细胞爬片的制备  25
    3.5 人胚髁突软骨细胞的形态学观察  25
    3.6 绘制生长曲线  25
    3.7 人胚髁突软骨细胞鉴定  25-26
  4 实验结果  26-30
    4.1 人胚髁突软骨细胞的形态学观察  26-28
    4.2 第二代人胚髁突软骨细胞生长曲线分析  28-29
    4.3 人胚髁突软骨细胞鉴定结果  29-30
  5 讨论  30-32
  6 小结  32-33
第三部分雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响  33-39
  1 实验目的  33
  2 实验材料  33-35
  3 实验方法和步骤  35-36
    3.1 软骨细胞准备  35
    3.2 实验分组  35
    3.3 呈色  35
    3.4 比色  35-36
    3.5 统计学分析  36
  4 实验结果  36-37
  5 讨论  37-38
  6 小结  38-39
全文总结  39-44
综述  44-52
  参考文献  48-52
致谢  52-53
作者简介  53

雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响

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