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抗病毒中药的固有免疫调节机理研究

作　者: 刘伟伟
导　师: 丁维俊
学　校: 成都中医药大学
专　业: 免疫学
关键词: 甘草酸 氧化苦参碱 固有免疫 IFNβ1 IRF3 甲型流感病毒
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的筛选出部分具有抗病毒活性的中药成分,通过免疫学方法研究其固有免疫调节机理,为开发抗病毒药物奠定实验基础。方法采用细胞培养法建立甲型流感病毒感染细胞模型,MTT比色法观察浓度梯度的代表性抗病毒中药活性成分(氧化苦参碱、黄芪多糖、野黄芩苷、甘草酸、虎杖苷和白藜芦醇)对甲型流感病毒的抑制作用。同时通过RT-PCR法,检测各中药单体直接作用于细胞后IFNβ1, IL-29, IRF3, ISG15等抗病毒固有免疫关键基因的表达水平。采用SPSS14.0统计软件对结果进行方差分析和多重比较。结果与讨论◆实验结果表明,中药单体黄芪多糖浓度375μg/mL时流感病毒感染细胞生存率为90.88%,氧化苦参碱浓度2000μg/mL时细胞生存率为80.67%,野黄芩苷浓度5μg/mL细胞生存率为80.84%,甘草酸浓度1.25μg/mL时细胞生存率63.00%,虎杖苷浓度2000μg/mL时细胞生存率81.16%,白藜芦醇浓度250μg/mL细胞生存率68.64%。◆所检测中药成分均对甲型流感病毒感染Hela细胞的病毒增殖抑制作用明显(P<0.01)；抗病毒效果与药物浓度呈一定程度的剂量依赖关系,不同浓度药物抗病毒作用差异不明显(P>0.05)。◆各组中药单体作用于细胞后,IFNβ1, IL-29, IFR3和ISG15表达量上调明显(P<0.05)。上调IFNβ1表达水平的能力依次为：黄芪多糖>甘草酸>氧化苦参碱>聚肌胞>虎杖苷>野黄芩苷>白藜芦醇；上调IL-29的能力依次为：虎杖苷>甘草酸>黄芪多糖>氧化苦参碱>白藜芦醇>野黄芩苷>聚肌胞,其中虎杖苷、甘草酸、氧化苦参碱、黄芪多糖之间差异显著(P<0.05)；上调ISG15的能力差异明显(P<0.05)：GA>聚肌胞。各组药物上调IRF3表达的作用差异不显著(P<0.05)。药物浓度和作用时间对基因表达的影响差异不明显(P>0.05)。◆基因表达情况与中药抗病毒作用不完全一致。提示固有免疫系统不是抗病毒中药的唯一作用途径。结论1、中药抗病毒固有免疫调节部分是通过调节IFNβ1, IL-29, ISG15, IRF3等抗病毒固有免疫关键基因的表达而起作用的。2、中药单体野黄芩苷、虎杖苷、黄芪多糖、白藜芦醇、甘草酸和氧化苦参碱在体外具有良好的抗甲型流感病毒的作用。其抗病毒机制与调节IFNpβ1、IL-29、IRF3等基因的表达有关。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-8
缩略词  8-10
前言  10-19
  1. 抗病毒中药的研究意义  10-11
    1.1 病毒性疾病研究的重要性  10
    1.2 中医药治疗病毒性疾病的优势  10-11
  2. 中药抗病毒的国内外研究现状  11-17
    2.1 抗病毒中药的国内外研究现状  11-16
    2.2 中药抗病毒实验方法的国内外研究现状  16-17
  3. 利用细胞培养法进行中药抗病毒研究的优势  17-18
  4. 本文研究思路及主要内容  18-19
实验一 甲型流感病毒的扩增及其血凝滴度测定  19-23
  1. 材料和方法  19-22
    1.1 材料  19
    1.2 方法  19-20
    1.3 消毒及善后处理  20-22
  2. 结果  22
  3. 研究小结  22-23
实验二 甲型流感病毒组织半数感染量(TCID50)测定  23-25
  1. 材料与方法  23-24
    1.1 材料  23
    1.2 方法  23-24
  2. 结果  24
  3. 研究小结  24-25
实验三 中药抗流感病毒体外试验研究  25-34
  1. 材料与方法  25-30
    1.1 材料  25-26
    1.2 方法  26-30
  2. 结果  30-31
  3. 研究小结  31-34
实验四 抗病毒中药的固有免疫调节机制研究  34-47
  1. 材料和方法  34-39
    1.1 材料  34-35
    1.2 方法  35-39
  2. 结果  39-46
  3. 研究小结  46-47
讨论  47-51
结语  51-52
问题与展望  52-53
参考文献  53-56
致谢  56-57
文献综述  57-69
  参考文献  67-69
附件1:公开发表的学术论文、专著及科研成果  69-71

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