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大黄是一味常用的重要中药,始载于《神农本草经》,其药用历史悠久,功效独特,有黄良、将军、川军等名。美国学者诺尔曼·泰勒在《改变世界的植物》一书中,将大黄列为有全球影响的十几种传统药物之一。大黄性寒、味苦,具有攻积导滞、泻火、凉血、活血祛瘀、利胆退黄等功效。甘草是我国的常用中药,自古甘草入药组方较多。南朝医学家陶景弘说:“此草最为众药之王,经方少有不用者”,故有“十方九草”之说,尊称“国老”。东汉张仲景的《伤寒杂病论》中记载了256首处方,其中含有甘草的处方就有154首,占总处方数的60%以上。所以各药与甘草配伍的中药组方相当广泛,可见甘草的重要。大黄甘草汤出自张仲景的《金匮要略》,该方原治实热积滞胃肠,食已即吐,大便秘结者,沿用至今,并被日本等国广泛采用,主治便秘。大黄通便,甘草润燥缓急,助大黄通滞泻下而不伤正。大黄甘草汤为中药复方中最简单的配伍之一,是研究中药复方化学成分中甘草与大黄配伍时其中主要成分在体内外的相互作用的代表性和理想的模型。目的通过实验研究大黄甘草汤中大黄与甘草的主要化学成分在体外体内的相互作用,为临床合理应用含大黄与甘草的组方奠定基础。方法测定大黄甘草汤单煎、合煎两种方法中大黄蒽醌和甘草酸的含量。按处方比例准确称取大黄4g,甘草1g待用。于圆底烧瓶中加入药材量20倍的水加热至沸,下甘草,回流提取15min后,下大黄,再回流提取25min后离心,即得大黄甘草汤合煎液。准确称取大黄4g,甘草2g,按上述方法操作,即得大黄甘草汤4︰2合煎液。准确称取大黄4g,甘草4g,按上述方法操作,即得大黄甘草汤4︰4合煎液。准确称取大黄4g,甘草6g,按上述方法操作,即得大黄甘草汤4︰6合煎液。游离蒽醌的提取,精密量取各煎液5mL于圆底烧瓶中,加水10mL,混匀,加氯仿水浴回流3次,分取氯仿层,合并氯仿提取液,水浴蒸干溶剂,残渣用适量甲醇溶解于10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为游离蒽醌含量测定供试品溶液。总蒽醌的提取,精密量取大黄提取液5mL于圆底烧瓶中,加水10 mL、盐酸2mL,混匀,加氯仿水浴回流提取3次(使结合蒽醌水解为游离蒽醌),分取氯仿层,合并氯仿提取液,水浴蒸干溶剂,残渣用适量甲醇溶解于10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为总蒽醌含量测定供试品溶液。在色谱柱Angilent公司Zorbox SB C18(150 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-水-冰乙酸(77︰22︰1),检测波长428 nm,流速1.0 ml/min,柱温室温的条件下测定大黄蒽醌包括游离蒽醌和结合蒽醌的含量。在色谱柱为迪马C18(250mm×416 mm),流动相为甲醇-水-冰乙酸(83.5︰15︰1.5),检测波长254 nm,流速1.0 ml/min,柱温室温的条件下测定甘草酸的含量。建立高效液相色谱法测定大黄酸血浆样品中大黄酸含量,并进行精密度与回收率的实验。采用SD雄性大鼠50只,随机分成5组,分别大黄酸灌胃组(rh i.g.)、甘草酸灌胃诱导组(GL i.g.)、甘草酸静脉注射诱导组(GL i.v.)、甘草次酸灌胃诱导组(GA i.g.)、甘草次酸静脉注射诱导组(GA i.v.),每组10只,诱导期为7d,甘草酸(GL)及次酸(GA)剂量均为50mg/kg,实验前12h禁食不禁水。灌胃给药后在不同时间点测定各血浆样品中大黄酸浓度,利用3p97药代动力学软件进行房室模型的拟合并计算大黄酸药物代谢动力学参数AUC、Cmax、CL,比较各种处置条件下大黄酸在大鼠体内吸收的差异。结果大黄甘草汤提取20 min与60 min相比,蒽醌含量相当,但都比40 min的少,游离蒽醌少20%~40%,总蒽醌也少在10%以上,可见大黄煎煮5 min或太长(45min),蒽醌含量都很低,只有大黄甘草汤提取40 min,即大黄提取25 min时,游离蒽醌和总蒽醌的含量都是最高的。且甘草酸的量也是提取40 min时是最高的。大黄单煎及大黄甘草4︰1、4︰2、4︰4和4︰6比例配伍后,总蒽醌类化合物煎出量变化不明显,为1.54、1.44、1.69、1.50和1.86 mg/g,基本保持恒定。但在合煎液中结合型蒽醌的含量0.83、1.09、1.11除4︰4配比外都比单煎的0.75 mg/g要高,而游离型蒽醌的含量0.60、0.58、0.76、0.72 mg/g都比单煎0.78mg/g要低。大黄与不同比例甘草合煎后,甘草酸的煎出量在合煎液中均比单煎液中高,甘草1g单煎(6.88mg/g),合煎4︰1(18.13mg/g);甘草2g单煎(8.34mg/g),合煎4︰2(14.65mg/g);甘草4g单煎(7.22mg/g),合煎4︰4(10.83mg/g);甘草6g单煎(8.99mg/g),合煎4︰6(10.80mg/g)。在经典方剂中大黄与甘草4︰1配伍时,甘草酸的煎出量是单煎时的2.6倍。GL灌胃诱导组、GL静脉注射诱导组、GA灌胃诱导组、GA静脉注射诱导组与rh灌胃组不论在AUC、Cmax还是CL这些药动学参数上对大黄酸均P<0.01,具有统计学意义,显著降低了大黄酸的生物利用度,清除率明显提高,加快了机体对大黄酸的代谢。GA灌胃诱导组与GL灌胃诱导组相比,GA灌胃诱导组AUC、Cmax明显降低而CL明显提高,P<0.01说明GA灌胃诱导组比GL灌胃诱导组对大黄酸的代谢作用更强。GA静脉注射诱导组与GL静脉注射诱导组相比,AUC、Cmax明显降低而CL明显提高,P<0.01。说明GA静脉注射诱导组比GL静脉注射诱导组对大黄酸的代谢作用更强。GA在灌胃诱导和静脉注射诱导条件下,GA静脉注射诱导组对大黄酸的抑制能力更强。除Cmax外,AUC明显减小,而CL明显增大,P<0.01。说明在静脉注射条件下,甘草次酸对大黄酸的抑制更强。GL在灌胃诱导和静脉注射诱导条件下,GL静脉注射诱导组对大黄酸的抑制能力更强。除Cmax外,AUC明显减小,而CL明显增大,P<0.01。说明在静脉注射条件下,甘草酸对大黄酸的抑制更强。结论甘草与大黄配伍主要化学成分甘草酸和大黄酸在体外及体内均存在相互作用,在体外甘草酸抑制了大黄酸的溶出。在大鼠体内,甘草酸及其代谢产物均加快了大黄酸的代谢,诱导肝药酶P450,而且甘草酸的代谢产物甘草次酸对大黄酸的抑制超过了甘草酸。
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