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兔视网膜光凝后色素上皮的修复及相关因子的表达

作　者: 董艳敏
导　师: 金学民
学　校: 郑州大学
专　业: 眼科学
关键词: 激光光凝视网膜铺片组织病理学免疫组织化学
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景与目的从第一台红宝石激光治疗眼病以来,已有十余种激光相继应用于眼科。由于激光治疗方法优越、疗效确切,激光手术在眼科治疗学中已占有重要地位,其中在治疗眼底疾病方面的应用尤为广泛。视网膜激光光凝术可用于治疗视网膜血管性疾病如:糖尿病视网膜病变、视网膜中央静脉阻塞和早产儿视网膜病变;封闭视网膜裂孔;光凝小梁网、虹膜和睫状体治疗青光眼;以及治疗眼内肿瘤等。尤其对于视网膜缺血性疾病,激光光凝术已或为最有效的治疗手段之一。尽管在临床上已得到广泛的应用并取得了很好的治疗效果,但对其确切机制尚不十分清楚。目前主要有以下几种推测:第一,视网膜光凝后,一部分视网膜被破坏,视网膜面积减少,改善了残余视网膜的营养状态。第二,光凝使外层视网膜萎缩变薄,使脉络膜氧更容易进入内层视网膜,从而改善内层视网膜缺氧状态。第三,光凝破坏了部分的视网膜组织,使缺血的视网膜释放的新生血管因子减少。第四,由于外层血-视网膜屏障破坏,促进了新生血管因子从视网膜向脉络膜扩散。由于在激光光凝病变视网膜的同时,也会对正常组织细胞造成损害,因此来源于治疗过程中的并发症难以避免,如出血、视网膜膜前膜、视网膜裂孔、脉络膜新生血管及黄斑水肿等。如何在达到治疗效果的同时使损伤达到最小化是现今激光治疗学中普遍关心的问题。色素上皮层和脉络膜中的黑色素是视网膜光凝术中光吸收的主要部位。在生理的状态下RPE细胞分泌多种细胞因子和生长因子。激光光凝不但可引起色素上皮细胞形态和生长规律的改变,还能够改变其分泌细胞因子和生长因子的质和量。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)分别作为主要的促血管生成因子及抑制血管生成因子在生理性及病理性血管形成中发挥着重要作用。视网膜光凝术能否通过影响这些生长因子和细胞因子的表达来发挥治疗作用,也成为了许多实验研究的焦点。本实验旨在建立色素家兔视网膜激光光凝模型的基础上,观察视网膜的组织病理学变化及色素上皮的修复过程,并检测激光光凝前后视网膜中色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的变化。以进一步探讨视网膜激光光凝术的治疗机制。材料与方法15只健康有色家兔随机分为两组:实验组12只(24眼)、正常对照组3只(6眼)。实验组依术后不同时间点分为1d、3d、7d、28d 4个亚组,每组3只(6眼)。对实验组双眼实施氪离子激光光凝术,照射部位选在视盘下方后极部视网膜,距视盘约2PD,激光参数:功率75mW,光斑直径200pm,照射时间0.1s。按不同时间点将兔处死后,随机选取一眼行色素上皮铺片,对侧眼用于病理切片制作。色素上皮铺片观察色素上皮的损伤与修复;HE染色在光镜下观察激光对视网膜和脉络膜造成的组织学改变;免疫组织化学染色方法检测视网膜组织中PEDF及VEGF表达的变化。所有数据以SPSS12.0统计软件包进行处理,计量资料用(?)±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,q检验进行两两比较,以a=0.05作为显著性检验水准。结果1.眼底彩照:正常色素兔视网膜透明薄弱,可透见色素层及脉络膜大血管。光凝后出现视网膜水肿,激光斑呈白色:随时间延长,视网膜水肿减轻,光斑逐渐变为灰色,且有相互融合的趋势。2.色素上皮铺片:正常色素上皮为一单细胞层,细胞大小均一、边界清晰、呈六边形、铺路石状整齐排列。光凝后激光斑周边细胞在大小、形态及色素沉着方面呈现不均一性;光斑内可见细胞坏死、萎缩、缺失,后期通过激光斑周围细胞的增殖、移位填补修复损伤。3.组织病理学观察:正常视网膜各层结构清晰,细胞完整。激光光凝后光凝斑区域外层视网膜细胞结构破坏,细胞坏死、核碎裂、崩解,炎性细胞浸润,随后色素上皮细胞和成纤维细胞增生修复损伤。4.免疫组织化学:正常对照组PEDF及VEGF蛋白阳性信号均可见于光感受器细胞层、内颗粒层及神经节细胞层。光凝后视网膜中PEDF蛋白的表达明显升高,3d时达到高峰,之后逐渐下降,至28d时仍高于对照组水平;视网膜组织中VEGF的表达在光凝后1d表达增强,3d时开始下降至正常水平,28d时明显低于对照组。结论1.激光光凝可以引起外层视网膜结构破坏、细胞减少,视网膜通过RPE细胞和成纤维细胞增殖修复损伤区。2.激光光凝可以刺激RPE细胞的增殖,RPE细胞在激光损伤修复过程中发挥着重要作用。3.激光光凝可以上调视网膜中PEDF的表达,下调VEGF的表达,使血管生成因子与抑制因子达到新的平衡,从而发挥其抑制新生血管的治疗作用。

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摘要  3-6
Abstract  6-11
论文部分兔视网膜光凝后色素上皮的修复及相关因子的表达  11-34
  引言  11-12
  材料  12-13
  方法  13-15
  结果  15-18
  讨论  18-24
  结论  24-25
  附图  25-29
  参考文献  29-34
综述部分微脉冲半导体激光视网膜光凝治疗眼底疾病  34-48
  正文  34-43
  参考文献  43-48
附录部分  48-49
  中英文缩略词对照表  48-49
  致谢  49

兔视网膜光凝后色素上皮的修复及相关因子的表达

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