学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

小鼠腹膜淋巴孔的发育学研究

作　者: 李慧
导　师: 李继承
学　校: 浙江大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 腹膜淋巴孔发育学腹膜腔毛细淋巴管酶组织化学腹膜间皮细胞吸收功能台盼兰小鼠计算机图像
分类号: R329.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
下　载: 30次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

背景和目的Von Recklinghausen在光学显微镜下发现，隔腹膜表面相邻间皮细胞连接处有小孔，他首先命名这些小孔为腹膜淋巴孔（lymphatic stomata，LS），并认为LS是腹膜腔与腹膜下淋巴管之间的一个直接通道。1977年Tsilibary等首先把电子显微镜技术应用于LS的研究，并在电子显微镜下证实了小鼠LS后，一些学者相继在不同动物观察到LS。1990年李继承等首次报导了人腹膜LS，并认为LS是一相对恒定的结构。 LS是腹膜下毛细淋巴管在腹膜间皮细胞之间的开口。籍LS，腹膜腔与脉管系直接相通。LS具有主动的吸收功能。Leak把细菌和一些药物颗粒注入小鼠腹膜腔，发现这些颗粒迅速通过LS。李继承等分别把台盼兰液和小鼠红细胞注入小鼠和家兔腹膜腔，在电子显微镜下，观察到台盼兰颗粒和红细胞被LS吸收。Nanba的研究还发现，肿瘤细胞也可经LS转移。因此，无论是在生理或病理情况下，LS都被认为是腹膜腔内液体、颗粒物质和细胞成分转归的最主要途径。它与腹水的吸收，腹膜透析失超滤，肿瘤细胞转移和扩散等密切相关。作为人体的一种恒定结构，LS的形态和功能已被许多学者所关注，但迄今为止，有关LS发育学的资料甚少。国内学者尚未做过此方面的研究。本实验运用扫描电镜和计算机图像处理、透射电镜和酶组织化学等技术对胚胎鼠和出生后各年龄段小鼠隔腹膜LS和隔淋巴管进行研究。并阐述了LS和隔淋巴管的动态发生和发育，为进一步开展LS的功能研究和临床应用提供发育学资料。材料和方法1、动物饲养与分组：NIH小鼠共150只，每笼3只，按雌雄比例2：l混合饲养。雌鼠以出现阴道栓为妊娠第 1大（Embryonc day，EDI）。取胚胎 13大（Embryonc days13，ED13）、胚胎 15大（Embryonic days 15，ED15）、18大（ED18），出生后 1大（Postnatal day，PDI）、5大（PDS）。10大（PD10）和成年小鼠隔腹膜组织各30例。2、透射电镜样本制备与观察：把脯腹膜修剪成 IX lmm’人小的组织块，2．5％戊二醛和 1％饿酸双！刘定，2％醋酸铀块染，梯度乙醇和丙酮脱水，Epon slZ包埋，光镜定位，超薄切片，醋酸铀和构除酸铅双重染色，P hi i p S E M 4I0型透射电镜观察，加速屯压60Kv。3、扫描电镜制样、观察：2．5％戊二醛利1％饿酸双固定，2％单宁酸导电处理，梯度乙醇和100％丙酮脱水，100％醋酸异戊酯置换。HCP－2型临界点干燥仪干燥，E－1020型离于溅射仪镀金膜，Stereoscan 260型扫描屯镜观察，加速电压20Kv。4、Elescope 计算机图像处理软件：模拟的扫描电镜图像视频信号通过图像采样卡（FlyVideo98）变换为数字图像后存入计算机硬盘，并采用 Elescope刀图像处理软件进行分析处理。该软件根据图象的灰度值，可对采样后的数字图像进行白动和半自动分析。5、统计学处理：计算各年龄段小鼠CMC区域的面积及其占隔腹膜的面积白分比，隔LS的平均面积和平均分布密度。以X上S 表示。6、酶组织化学：（1）冰冻切片：取新鲜隔肌样本，修剪成长方形，用0．IM PSS冲洗，Leca CM3050型冰冻切片 2机切片；（2）5’－核督酸酶（Nase）－碱性磷酸酶（Alpase）双重染色：反应液 1（0．IMol／L Tris＊匝丁烯二酸缓冲液 42m！，5’－AMP20mg，2．5％硫酸镁sin！，蔗糖3g，2％硝酸铅3ml，PH7．2）孵育1小时，水浴箱温度控制在37—38oC，双蒸水漂洗后经1％硫化胺显色；反应液 2（蔡酚 AS－BI 20mg，DMF 0．sml，0．！Mol／LTr卜－盐酸缓冲液50ml，固蓝B盐50mg，PHg．2）孵育二小时，水浴箱温度控制在37－38oC，双蒸水漂洗，晾干，中性树脂封片，光学显微镜观察并拍照。并作空白对照组、5”－Nase单染对照组和 AIPase单染对照组。7、腋肌淋巴管发育的动态观察：根据j＆肌淋巴管发育的形态特征和酶组织化学反应的强度，对小鼠厢淋巴管的发育进行半定量分析。结果 l．胚胎期立方型细胞（cuboidal mesothelial cell，CMC）和早期腹膜淋巴孔（nonage lymphatic stomata，NLS）N生：E DI3 隔腹膜表面覆盖着一层扁平型间皮细胞（fi a t t e n e dmesotheia eel，FMC）；ED15隔腹膜肋部开始出现散在分布的CMC 以及其间的NLs，腹膜卜无毛细淋巴管：BD18 隔腹膜胸骨部和脊柱部出现成簇状分布的立方细胞区域利 N L S。隔腹膜下开始出现毛细淋巴管。台盼兰试验显示胚胎期NLS还不具备物质吸收功能；二．出生后成熟腹膜淋巴孔（matured lymphatic引。m队a，MLS）发生：P01期肠腹膜肌性部出现条带状分布的立方细胞区域，肌－中心腆交界处以及中心胸部也出现成簇状分布的CMC区域。CMC之间存在许多LS。在LS 内，发现有淋巴管内皮细胞的突起。观察超薄切片，发现形成LS的CMC基底膜利其深面的结缔组织断开（dsrupted），淋巴管的两相邻内皮细胞向 LS伸出胞质突起，并且和 CMC靠近，构成了腹膜下小管（。hannel）。腹膜下小管与 LS沟通，腹膜腔物质引流?

全文目录

一．中文摘要  3-7
二．英文摘要  7-12
三．论文正文  12-47
  前言  12-14
  材料与方法  14-22
  实验结果  22-41
  讨论  41-43
  结论  43-44
  参考文献  44-47
四．综述：中国医学科学院学报，2000，22（6）585-588  47-51
五．已完成论文  51-60
六．致谢  60

小鼠腹膜淋巴孔的发育学研究

内容摘要

全文目录

相似论文