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嵌合猪圆环病毒的构建及其对仔猪的免疫原性

作　者: 邵小雪
导　师: 周双海；冉多良；王治才
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪圆环病毒1型猪圆环病毒2型感染性DNA克隆嵌合猪圆环病毒免疫原性
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

猪圆环病毒(PCV)具有PCV1和PCV2两种基因型,PCV1没有致病性,PCV2则可引起猪断奶后多系统消耗综合征等疾病。本研究通过克隆PCV1全基因组序列,构建出PCV1感染性DNA克隆;通过构建嵌合PCV(PCV1-2)感染性DNA克隆,获得生物纯PCV1-2,并通过仔猪接种试验分析了PCV1-2对仔猪的免疫原性。用PCR技术扩增与克隆出1株PCV1全基因组,命名为BJ-1株。全基因组序列结果显示该株与其它PCV1分离株的核苷酸同源性为99.4%,主要开放阅读框(ORF)序列结果显示其核苷酸同源性在92.7%以上。虽然各个PCV1分离株之间的全基因组与主要ORF的核苷酸同源性均很高,但仍然呈现出一定的地域相关性。将PCV1全基因组克隆入载体pBluescriptⅡsk(+),构建出PCV1 DNA克隆,将其转染PK-15细胞系后获得拯救病毒PCV1。将拯救PCV1在PK-15细胞系连续培养5代后,其TCID50达到106.55/mL,显示出较高的感染滴度。用反向PCR技术缺失掉PCV1 ORF2,并替换入PCV2 ORF2,构建出嵌合猪圆环病毒(PCV1-2)DNA克隆,将其转染PK-15细胞系后获得生物纯PCV1-2。将PCV1-2在PK-15细胞系连续培养5代后,其TCID50达到106.05/mL,表明获得了具有较高感染滴度的PCV1-2。将PCV1-2接种35日龄健康仔猪,观察仔猪的临床变化,用ELISA方法测定血清中PCV2 ORF2抗体,用常规和荧光定量PCR技术测定血清与组织中PCV1-2 DNA含量。结果显示,仔猪接种PCV1-2后未出现可见的临床症状和大体病理变化,仔猪增重和饲料转化效率未受影响;血清中PCV2 ORF2抗体在接种后第14 d出现阳转,第28 d时抗体阳性率达到100%,表明PCV1-2对仔猪具有良好的免疫原性;血清中PCV1-2 DNA含量在接种后逐渐上升,第28 d时达到最高,之后迅速下降;第35 d宰杀时,仔猪肺门淋巴结中病毒含量最高,心脏的病毒含量最低;而常规PCR技术均难以检出PCV1-2 DNA,表明PCV1-2接种后只引起仔猪的轻微感染。综合分析表明,本试验成功构建出具有较高感染滴度和良好免疫原性的嵌合猪圆环病毒,为PCV2弱毒疫苗研发奠定了良好基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章引言  9-18
  1.1 国内外研究现状  9-16
  1.2 研究目的与意义  16
  1.3 研究内容与技术路线  16-17
  1.4 研究目标  17-18
第二章猪圆环病毒1 型全基因组的克隆与鉴定  18-30
  2.1 前言  18-19
  2.2 材料  19-21
  2.3 方法  21-24
  2.4. 结果与分析  24-28
  2.5 讨论  28-29
  2.6 小结  29-30
第三章猪圆环病毒1 型感染性DNA 克隆的构建  30-46
  3.1 前言  30-31
  3.2 材料  31-34
  3.3 方法  34-40
  3.4 结果与分析  40-44
  3.5 讨论  44-45
  3.6 小结  45-46
第四章嵌合猪圆环病毒的构建  46-63
  4.1 前言  46-47
  4.2 材料  47-51
  4.3 方法  51-56
  4.4 结果与分析  56-61
  4.5 讨论  61-62
  4.6 小结  62-63
第五章嵌合猪圆环病毒对仔猪的免疫原性  63-76
  5.1 前言  63-64
  5.2 材料  64-66
  5.3 方法  66-68
  5.4 结果及分析  68-74
  5.5 讨论  74-75
  5.6 小结  75-76
第六章结论  76-77
第七章创新点  77-78
参考文献  78-83
致谢  83-84
作者简介  84

嵌合猪圆环病毒的构建及其对仔猪的免疫原性

内容摘要

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