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猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究

作　者: 陆文昊
导　师: 章孝荣；张运海
学　校: 安徽农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 猪MII期卵母细胞化学去脂玻璃化冷冻冷冻载体冷冻保护剂
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

为了探索建立有效、价廉而易操作的猪卵母细胞玻璃化冷冻方案,本研究以猪体外成熟MII期卵母细胞为试验材料,着重从冷冻保护剂、冷冻载体、玻璃化冷冻前预处理(化学去脂)等环节出发,开展了如下四个方面的试验。(1)试验一研究了化学去脂(chemicaldelipation)对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻的影响。结果显示:①存活率:化学去脂组和直接冷冻组、离心冷冻组差异不显著(P>0.05)②卵裂率:化学去脂组和直接冷冻组、离心冷冻组差异显著(P<0.05),离心冷冻组和直接冷冻组差异不显著(P>0.05)③囊胚率:化学去脂组和直接冷冻组差异显著(P<0.05),化学去脂组和直接冷冻组差异不显著(P>0.05)。结果说明:化学去脂后有助于提高猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻效果。(2)试验二比较了开放式拉长细管法(Open pulled straws,OPS)与冷冻帽(Cryotop)、自制载体Cryotip用于猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻的效果。结果显示:我们自行研制的冷冻片(Cryotip)与OPS(对照组1)、Cryotop(对照组2)之间在存活率、卵裂率和囊胚率各组之间差异均不显著(P>0.05),说明自制载体具有和成品载体一样的冷冻效果,可以取代昂贵的商业化载体用于卵母细胞玻璃化冷冻。(3)研究了ES1+VS1、ES2+VS2、ES2+VS3、ES2+VS4四种冷冻保护剂的组合对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻发育效果的影响。结果显示:①存活率、卵裂率:ES1+VS1、ES2+VS2、ES2+VS3、ES2+VS4各组差异均不显著(P>0.05)②E S2+VS2、ES2+VS3与ES1+VS1(对照组)囊胚率上差异显著(P<0.05),结果说明用不含有DMSO的冷冻保护剂冷冻猪MII期卵母细胞也是可行的。(4)分别运用含不同糖份的冷冻复苏液实施玻璃化冷冻复苏,研究含不同糖份的冷冻保护剂对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻发育效果的影响。结果显示:①海藻糖、聚蔗糖(ficoll 400)与蔗糖(对照组)在存活率、卵裂率和囊胚率各组之间差异均不显著(P>0.05)②在海藻糖和蔗糖的冷冻保护剂中的试验中均得到了囊胚,而在聚蔗糖中没有得到囊胚。试验表明:运用海藻糖玻璃化冷冻猪MII期卵母细胞是可行的。综上所述,本研究中选用Cryotop作玻璃化冷冻载体,使用EG+DMSO+蔗糖或者海藻糖冷冻保护剂,并在猪的MII期卵母细胞玻璃化冷冻之前对其实施预处理(化学去脂),成功建立了猪的MII卵母细胞有效、经济、稳定的玻璃化冷冻复苏及体外培养技术体系。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-11
英文缩略词表  11-12
文献综述  12-21
引言  21-23
1 材料与方法  23-34
  1.1 试验材料  23
  1.2 主要试剂与溶液  23
  1.3 主要仪器  23-24
  1.4 试剂与溶液配制  24-27
  1.5 方法  27-30
  1.6 统计分析  30
  1.7 试验设计  30-34
2 结果  34-39
  2.1 化学去脂对猪MII 期卵母细胞玻璃化冷冻的影响  34-35
  2.2 自制新型冷冻载体对猪MII 期卵母细胞的冷冻效果评价  35-36
  2.3 不同冷冻保护剂对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响  36-37
  2.4 不同糖份对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响  37-39
3 讨论  39-43
  3.1 化学去脂对猪MII 期卵母细胞玻璃化冷冻的影响  39-40
  3.2 自制新型冷冻载体对猪MII 期卵母细胞的冷冻效果评价  40-41
  3.3 不同冷冻保护剂对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响  41
  3.4 不同糖份对猪MII 期卵母细胞的玻璃化冷冻的影响  41-43
4 结论  43-44
参考文献  44-53
致谢  53-55
个人简介  55-56

猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究

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