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海藻糖用于玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的研究

作　者: 王念念
导　师: 刘雨生
学　校: 安徽医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 卵母细胞共孵育海藻糖玻璃化冷冻
分类号: R318.52
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 32次
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内容摘要

目的(1)通过小鼠成熟卵母细胞的海藻糖负载实验,探讨海藻糖载入卵母细胞内的方法的可行性;探讨载入卵母细胞内的海藻糖的定量分析;探讨卵母细胞内载入适量海藻糖对卵母细胞成活率的影响。(2)通过对小鼠成熟卵母细胞的玻璃化冷冻,进一步探讨玻璃化冷冻卵母细胞的方法;同时比较载入海藻糖的卵母细胞与未载入海藻糖的卵母细胞经过玻璃化冷冻后的成活率。(3)探讨海藻糖孵育并进行玻璃化冷冻对卵母细胞的发育潜能的影响。方法(1)60只清洁级成年健康ICR雌性小鼠,进行控制性超排卵(COH),将获得的卵母细胞放入0.5mol/L的海藻糖中分为2组进行孵育(37℃1h;37℃2h;37℃3h)。(2)通过PI、Hoechst 33342对海藻糖孵育后及未使用海藻糖孵育的卵母细胞进行染色,观察卵母细胞在高渗的细胞外环境下是否出现卵母细胞的死亡。(3)对孵育后的卵母细胞进行胞内海藻糖处理,利用硫酸蒽酮法进行胞内海藻糖的测定。(4)利用玻璃化冷冻方法对用海藻糖孵育的卵母细胞及未使用海藻糖孵育的卵母细胞进行冷冻,解冻后观察卵母细胞成活率。(5)将玻璃化冷冻解冻后的孵育组与未孵育组的卵母细胞在复苏后体外培养＞2h后,采用IVF方法授精,通过卵母细胞两细胞形成率及囊胚形成率测定冷冻对卵母细胞的发育潜能的影响。结果(1)0.5mol/L的海藻糖孵育后卵母细胞的体积较未孵育的卵母细胞缩小,卵母细胞胞间隙明显增大,且在孵育3h时的胞质颗粒较孵育1h及2h的卵母细胞粗大。(2)通过硫酸蒽酮法测定到经孵育后3h的卵母细胞胞内海藻糖浓度为35ummol/L,而孵育1h及2h未测出含量。(3)经海藻糖孵育后的卵母细胞存活时染色质被Hoechst 33342染色成为蓝色,死亡的卵母细胞被PI、Hoechst 33342染色染色质成为粉红色。(4)利用15%EG+15%DMSO+0.5M Trehalose+10%SSS对孵育后及未孵育后的卵母细胞进行玻璃化冷冻,复苏后两组的成活率分别为:92.4%VS 92.6%(P＞0.05)。(5)两组的2-细胞形成率及囊胚形成率分别为80%VS23.3%(P＜0.05);13.3%VS 0%(P＞0.05)。结论通过海藻糖孵育方法进行玻璃化冷冻卵母细胞得到结论如下:(1)通过将卵母细胞置于高浓度的海藻糖溶液中的方法可以使海藻糖载入到的卵母细胞胞内部。(2)高浓度的海藻糖内孵育卵母细胞≤3h不会对其存活造成影响。(3)经孵育3h的卵母细胞行玻璃化冷冻的成活率与对照组无统计学上的差异(P＞0.05);但是在2-细胞形成率有明显差异(P＜0.001),而在囊胚形成率上没有差异(P＞0.05)。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
正文  10-41
  引言  10-15
  第一部分  15-22
    1 材料与方法  15-18
    2 结果  18-22
  第二部分  22-29
    1 材料与方法  22-25
    2 结果  25-29
  讨论  29-35
  结论  35-36
  参考文献  36-41
致谢  41-42
个人简介  42-43
综述  43-51

海藻糖用于玻璃化冷冻小鼠卵母细胞的研究

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