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心肌细胞膜与中药朱砂七水溶性成分作用的色谱法研究

作　者: 李明华
导　师: 张志琪
学　校: 陕西师范大学
专　业: 分析化学
关键词: 在线测定心肌细胞膜 ATP酶活性朱砂七蒽醌类化合物响应表面设计
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

生物膜色谱是近些年发展起来的一种新的液相色谱模式。细胞膜色谱法能够模仿药物在体内与受体的作用过程,对中药活性成分筛选、分离进行一体化分析,已经成为了生物膜色谱的一个重要分支。随着生命科学、分析科学的发展和人们对细胞膜色谱研究的深入,细胞膜色谱也在不断得到改善发展。而细胞膜固相萃取色谱能够克服细胞膜色谱的一些不足,在中药活性筛选中更具有应用前景。本论文包括综述和研究报告两部分第一部分:综述1.生物色谱法及在中药活性成分筛选研究中的应用传统的色谱研究中药时,HPLC仅仅作为一种分离工具,无法表征活性成分的药理参数,而且存在干扰问题。生物色谱法兼有色谱和生物技术的优点非常适于成分复杂的中药及天然药物的筛选、分析。生物色谱法已经衍生出了分子生物色谱、仿生物膜色谱、细胞色谱法、植物性细胞色谱、细胞膜色谱法,细胞膜固相萃取色谱法等分支。对各个色谱法的原理及在中药活性成分筛选研究中的应用做了综述,最后对生物色谱法存在的问题及解决方法做了介绍并对生物色谱法的发展前景进行了展望。2.中药朱砂七的研究概况包括朱砂七的化学成分的研究概况和朱砂七的药理作用的研究概况。朱砂七主要含蒽醌类化合物,鞣质及水溶性蛋白多糖。蒽醌类化合物是主要活性成分。朱砂七中存在的蒽醌类化合物主要是大黄素及其葡萄糖甙、大黄素甲醚及其葡萄糖甙。朱砂七的药理活性主要表现在抗病毒、抗菌、消炎等方面。3.天然植物药中蒽醌类化合物的研究进展蒽醌类化合物是许多中草药中具有多种生物活性的有效成分,具有泻下、抗菌、降压降脂、抗癌、抗病毒,凝血等多种药理功能,应用前景非常广阔。本部分主要从中草药中蒽醌化合物的定义、存在、性质、提取分离方法和定量分析方法等方面进行综述。第二部分:研究报告一、心肌细胞膜的制备及理化参数的测定基于流动注射停留技术和软物质在线采集技术建立了一种快速磷钼染色法测定细胞膜三磷酸腺苷(ATP)酶活性的方法。与传统方法相比,该分析方法速度提高了7倍,而且操作简便,试剂消耗少。将该方法应用于兔心肌细胞膜ATP酶活性变化规律的研究,结果显示酶活性在研究时间内按一定规律递减,为细胞膜及其受体的纯度、活性等相关研究提供了重要信息。二、朱砂七水溶性有效成分的提取及工艺研究采用响应表面实验优化设计并结合单因素实验,以一种蒽醌甙的峰面积为评价指标,对朱砂七水溶性有效成分的提取工艺条件进行了优化。结果表明,浸渍法提取是较好的提取方式;并且提取效率受浸泡温度、浸泡时间、料液比的影响。采用27.3倍量的水、81℃、浸泡42.8min可以得到较好的提取效果。三、心肌细胞膜与朱砂七水溶性提取液作用的研究建立了心肌细胞膜固相萃取技术。该技术用包埋在大孔硅胶上的活性兔心肌细胞膜为固相萃取柱的填料,制成细胞膜固相萃取柱。将能与活性细胞膜上受体结合的化合物保留在固相萃取柱上。未结合的成分用pH 7.4Tris-HCl缓冲盐反复洗涤,并制作洗脱曲线。最后用pH 4.0的磷酸缓冲盐洗下可能与心肌细胞膜结合的成分。结果朱砂七水提液中有两种化合物在细胞膜萃取柱上可能没有结合,另外三种化合物在细胞膜萃取柱上可能有结合,经过确定其中有结合的一种主要成分可能是大黄素葡萄糖甙。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-10
第1章综述  10-24
  1.1 生物色谱法及在中药活性成分筛选研究中的应用  10-15
    1.1.1 生物色谱法的产生背景  10
    1.1.2 生物色谱法的基本原理及特点  10-11
    1.1.3 生物色谱法的分类及其在中药活性成分筛选应用  11-14
    1.1.4 小结  14-15
  1.2 朱砂七研究概况  15-16
    1.2.1 朱砂七化学成分研究概况  15-16
    1.2.2 朱砂七药理作用研究概况  16
  1.3 植物药中蒽醌类化合物的研究进展  16-24
    1.3.1 定义及植物来源存在形式及性质  17-18
    1.3.2 蒽醌化合物的提取分离  18-20
    1.3.3 蒽醌化合物含量测定  20-21
    1.3.4 小结  21-24
第2章研究报告  24-48
  2.1 心肌细胞膜的制备及理化参数的测定  24-31
    2.1.1 实验仪器与试剂  25-26
    2.1.2 实验原理及方法设计  26-27
    2.1.3 实验步骤  27-28
    2.1.4 结果与讨论  28-30
    2.1.5 小结  30-31
  2.2 朱砂七水溶性有效成分的浸渍法提取及工艺研究  31-40
    2.2.1 实验仪器与材料  31-32
    2.2.2 实验  32-33
    2.2.3 结果与讨论  33-39
    2.2.4 小结  39-40
  2.3 心肌细胞膜与朱砂七水提液作用研究  40-48
    2.3.1 实验仪器与材料  40-41
    2.3.2 实验  41-43
    2.3.3 结果与讨论  43-45
    2.3.5 小结  45-48
总结  48-50
参考文献  50-58
致谢  58-60
攻读硕士学位期间科研成果  60

心肌细胞膜与中药朱砂七水溶性成分作用的色谱法研究

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