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副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）HD1.7产肽条件优化及肽类分离研究

作　者: 高莹
导　师: 平文祥
学　校: 黑龙江大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 副干酪乳杆菌抗菌肽发酵分离纯化生物学特性
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

由乳酸菌产生的抗菌肽(antibacterial-peptides，ABP)作为新一代食品防腐剂，具有安全性好、生产成本低等特点，越来越受到人们的重视。副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)HD1．7产生的抗菌肽，对多种革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌以及酵母菌都有抑制作用，同时具有耐高温等特点，可作为新型食品防腐剂。本文对副干酪乳杆菌HD1．7所产抗菌肽进行了研究，优化其培养基成分以提高其产肽量，对其产生的抗菌肽进行了分离纯化，并对其生物学特性进行了初步探索。这些研究为该菌投入生产，广泛应用于食品药品、探讨抗菌肽对指示菌的作用位点、以及研究抗菌肽基因的克隆表达等工作奠定了基础。本研究通过以廉价的工业原料取代高成本的实验室原料，对副干酪乳杆菌HD1．7培养基成分进行比较，确定该菌产抗菌肽的最佳发酵培养基配方为：工业蛋白胨30g／L，葡萄糖10g／L，磷酸氢二钾1．5g／L，亚硫酸钠0．2g／L，乙酸钠7g／L，硫酸镁0．1g／L，硫酸锰0．025g／L，吐温-80 1．0mL／L，调节pH5．5。对副干酪乳杆菌HD1．7抗菌肽进行分离纯化，通过阳离子交换层析(CMSepharose Fast Flow)按照抗菌肽在溶液中的离子特性对其初步分离；对有抑菌活性的组分依据分子量大小不同，利用凝胶层析(Sephadex G-25、G-10)进行逐层分离。共分离得到5个活性组分，G10a，G10b，G10c，G10d和G10e，其中G10d的效价最高。根据SDS-PAGE结果，估测此抗菌肽分子量小于10kDa。抗菌肽的生物学特性研究表明，副干酪乳杆菌HD1．7抗菌肽在酸性条件下抑菌活性高，在pH4．0时，抑菌活性最高；具有很好的热稳定性，在121℃处理15min仍有抑菌活性；它不仅抑制革兰氏阳性菌，还能抑制革兰氏阴性菌，对酵母菌也有抑制作用，有很广的抑菌谱；该抗菌肽对胰蛋白酶敏感，但对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、K蛋白酶不敏感。该抗菌肽可抑制枯草芽孢杆菌的生长，但不能杀死细菌。粗产物在4℃长期保存仍具有很强的抑菌活性。

副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）HD1.7产肽条件优化及肽类分离研究

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