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重组乙肝病毒表面抗原为载体的流脑多糖蛋白结合疫苗特性研究

作　者: 卢佳丽
导　师: 杨晓明
学　校: 武汉生物制品研究所
专　业: 病原微生物
关键词: 重组乙肝表面抗原(CHO) 脑膜炎球菌多糖蛋白结合物免疫原性
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本课题的主要目的是以CHO细胞表达的重组乙肝病毒表面抗原为载体蛋白,制备A群脑膜炎球菌荚膜多糖与重组乙肝表面抗原的多糖蛋白结合物(GAMP-HBsAg),研究和评价该结合物的免疫原性和生物化学特性,并与以破伤风类毒素(TT)为蛋白载体的GAMP-TT结合物进行比较,探讨乙肝表面抗原作为多糖抗原的载体蛋白的可行性。采用溴化氰活化、ADH衍生、EDAC缩合的方式,制备了GAMP与重组乙肝表面抗原(CHO)的多糖蛋白结合物(GAMP-HBsAg);阴离子交换层析纯化GAMP-HBsAg;用免疫双扩散和ELISA方法对结合物免疫反应性进行评价;此外,对结合物的分子大小、衍生率、多糖含量、蛋白含量,以及CNBr和EDAC残留量进行检测;对结合物免疫小鼠后血清产生的特异性抗体滴度和抗体类型进行评价。实验结果表明,制备的四批GAMP-HBsAg洐生物的洐生率分别为2.04%、2.44%、1.67%和2.21%,对应的多糖蛋白比分别为1.21、1.42、1.87和1.65,结合物KD值均小于0.2。以两批GAMP-HBsAg结合物免疫小鼠,均可产生针对多糖的特异性IgG抗体,两批结合物抗体滴度分别为10.76EU和27.43EU ,多糖对照组抗体滴度为1.03EU,结合物组血清阳转率为100%。两批结合物与多糖组抗体平均几何滴度的比较有显著性差异;GAMP-TT产生抗体滴度为57.94EU, GAMP-HBsAg产生HBsAg特异性抗体滴度为58.5EU。综上所述,HBsAg作为载体蛋白制备的结合物(GAMP-HBsAg)在小鼠体内可产生针对多糖的特异性抗体,同时也能产生针对HBsAg的特异性抗体,因此,可作为候选载体蛋白。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
技术路线  9-10
前言  10-12
实验材料  12-16
实验方法  16-27
实验结果  27-36
讨论  36-39
论文总结  39-40
参考文献  40-43
论文综述  43-50
致谢  50

重组乙肝病毒表面抗原为载体的流脑多糖蛋白结合疫苗特性研究

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