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急性子化学成分及品质评价研究

作　者: 佟苗苗
导　师: 翟延君
学　校: 辽宁中医药大学
专　业: 生药学
关键词: 急性子有效部位化学成分品质评价微量元素多糖
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:急性子为凤仙花科植物凤仙花Impatiens balsamina L.的干燥成熟种子,始载于《救荒本草》,为我国传统药物之一,77版《中国药典》开始收载,性温、味微苦,归肝,脾经;具有破血软坚、消积的功效,用于癓瘕痞块、经闭、噎膈。急性子在临床还有用于食管贲门癌及肿瘤的治疗。但本品质量标准至今仍不完善,未见系统的品质评价研究资料,有效部位抗癌作用研究亦为空白。因此我们对急性子的化学成分、显微特征、TLC鉴别、检查项、浸出物和含量测定方法等进行了研究;对其有效部位抗肿瘤活性进行了筛选;应用响应面法优化多糖最佳提取工艺及最佳脱蛋白纯化方法;采用ICP-MS测定了9种人体必需微量元素,通过SPSS软件对数据进行了相关性分析和主成分分析,并阐明了元素与急性子药效具有的直接或辅助作用的相关性,为进一步建立急性子的药材质量标准及深入研究开发该品种提供科学依据。材料与方法:1.药效学研究内容运用MTT还原法,对急性子乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取部位、多糖进行体外抗肿瘤活性筛选。2.化学成分研究通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、重结晶、薄层分析、制备液相等方法对急性子乙酸乙酯萃取部位和水饱和正丁醇萃取部位反复分离纯化,并结合理化性质、波谱方法,参考相关文献数据,鉴定化合物结构。3.品质评价研究通过本草考证、观察植物形态、性状鉴别、显微鉴别、TLC、HPLC等方法进行。4.运用等离子体电感耦合质谱(ICP-MS)测定30个产地商品急性子中的9种人体必需微量元素的含量。采用SPSS软件对含量测定的数据进行相关性合分析,找出元素间相关规律;并对数据进行标准化,进行主成分分析,提取出主成分,拟合主成分综合得分函数,并计算主成分综合得分,作为药材质量评价的综合指标。5.多糖提取工艺,在单因素考察的基础上,以提取温度、提取时间、料液比为自变量,多糖得率为因变量,对自变量各水平的多元线性回归及二项式拟合,用星点设计-响应面法(CCD-RSM)优选最佳工艺,并进行预测分析和验证性实验。运用Box-Behnken Design-响应面法(BBD-RSM)优化酶法脱蛋白工艺。比较优化后的酶法、三氯乙酸法、酶-三氯乙酸法三种方法的脱蛋白效果。以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,筛选急性子多糖最佳脱蛋白方法。结果与结论:1.通过对急性子乙醇提取物三个萃取部位和多糖的体外抗肿瘤活性筛选,结果显示乙酸乙酯层抗肿瘤作用明显,正丁醇层亦有活性,作用较弱。可确定急性子的有效部位为乙酸乙酯部分和正丁醇部分;多糖亦有明显的抗肿瘤活性。2.从急性子的乙酸乙酯层和正丁醇层萃取部位分离纯化得到了8个化合物,分别为:①β-谷甾醇,②α-菠甾醇,③正十六烷酸,④指甲花醌甲醚,⑤槲皮素,⑥山柰酚,⑦胡萝卜苷,⑧豆甾醇,其中化合物③正十六烷酸、④指甲花醌甲醚、⑧豆甾醇为首次从急性子中分离得到。3.对急性子进行了形态学研究,包括本草考证、原植物及性状鉴别。按《中国药典》标准项目要求对急性子药材进行了鉴别项研究,提供了显微、薄层色谱鉴别方法及图谱。制定了急性子检查项和浸出物的限量标准。应用HPLC法对不同产地药材中槲皮素和山奈酚进行了含量测定方法学研究,建立了简单、准确、重复性好的品质评价方法,部分内容补充了药典空白。4.不同产地急性子中微量元素含量差异较大,各种微量元素含量之间存在相关性,对药效起主要或辅助的作用,可以解释急性子散淤消肿,破血软坚的功效理论。通过主成分分析建立的综合评价函数,可为不同产地药材质量评价提供新思路。5.通过星点设计-响应面法优化急性子多糖提取工艺,并筛选最佳脱蛋白方法,提高多糖纯度,为急性子多糖的药效学等进一步研究奠定基础。急性子多糖提取最优工艺条件为:料液比为1:25.8,提取温度为92.0℃,浸提时间为120.5min,浸提2次;最佳脱蛋白方法:酶法-TCA法。方法科学、简便、易行。

全文目录

摘要  8-10
Abstract  10-13
前言  13-14
文献综述  14-22
  一、本草考证  14-15
  二、生药学研究  15
  三、化学成分研究  15-17
  四、药理作用研究  17-19
  参考文献  19-22
第一章急性子药效学研究  22-33
  第一节有效部位体外抗肿瘤作用活性筛选  22-26
  第二节多糖体外抗肿瘤活性研究  26-32
  第三节小结  32-33
第二章急性子有效部位化学成分研究  33-62
  第一节提取与分离  33-36
  第二节化合物结构鉴定  36-45
  第三节多糖提取工艺研究  45-53
  第四节多糖脱蛋白纯化工艺研究  53-60
  第五节小结  60-61
  参考文献  61-62
第三章急性子品质评价研究  62-87
  第一节形态学研究  62-66
  第二节鉴别项研究  66-73
  第三节检查项  73-76
  第四节浸出物测定  76-78
  第五节含量测定  78-86
  第六节小结  86
  参考文献  86-87
第四章急性子微量元素研究  87-96
  第一节 9 种人体必需微量元素含量测定  87-91
  第二节不同产地药材微量元素相关分析  91-94
  第三节小结  94-95
  参考文献  95-96
结论  96-98
致谢  98-99
个人简历  99-100
附图  100-108

急性子化学成分及品质评价研究

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