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高繁山羊发情周期不同阶段子宫FSHRmRNA表达的定量分析及FSHR免疫阳性细胞分析研究

作　者: 魏军强
导　师: 王树迎
学　校: 山东农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 荧光实时定量RT-PCR 发情周期 FSHR 免疫组织化学子宫济宁青山羊
分类号: S827
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

促卵泡素(FSH)主要刺激卵巢卵泡的发育和成熟以及颗粒细胞产生雌激素及通过影响睾丸支持细胞的功能进而间接影响精子的形成。促黄体素(LH)则主要刺激卵巢膜细胞雄激素的产生,为卵巢颗粒细胞提供合成雌激素的底物,以及启动动物的排卵和维持黄体孕酮产生,在睾丸则刺激Ledig细胞产生雄激素,为精子的发育提供适宜的雄激素环境。促性腺激素与这些性腺器官的靶细胞膜的特异性受体结合,引起受体构型变化,调节腺苷酸环化酶的活性,催化三磷酸腺苷(ATP)转化为环一磷酸腺苷(cAMP),进而激活依赖cAMP的蛋白激酶,合成相应的mRNA,产生新的有效应的蛋白质。目前对于FSHR在性腺外组织表达的研究报道很少。选择与动物生殖相关的子宫作为研究对象,进一步揭示其在子宫中表达情况,以探讨其在子宫中表达的意义。本研究分为两部分:一、采用荧光定量RT-PCR方法研究了在不同发情阶段济宁青山羊子宫中促卵泡素受体(FSHR)基因的表达情况,并通过实时荧光定量PCR方法比较研究了发情周期不同阶段FSHR基因的表达量差异。二、采用免疫组织化学的方法研究了FSHR其在子宫中的定位与分布。研究结果如下1、在各个时期的子宫中都有FSHR基因的表达,在子宫颈间情期的表达水平最低(1.003±0.050),发情前期有所升高(5.660±1.517),发情期达到最高(8.419±2.430),发情后期又有所下降(2.361±0.097)。发情期与发情后期和间情期之间的差异均显著(P<0.05),发情周期的其它各个阶段相互之间差异不显著(P>0.05)。而在子宫角则不同,在发情前期(2.224±1.202)比间情期(1.043±0.295)和发情期(1.147±0.466)略高(P>0.05),发情后期(13.320±3.702)显著高于其它各个时期(P<0.05)。2、在子宫内膜固有层中也有散在的细胞染色阳性,子宫内膜的上皮细胞以及子宫腺的腺细胞呈阴性,而子宫颈上皮细胞呈阴性。

全文目录

中文摘要  7-8
Abstract  8-10
文献综述  10-30
  1 FSHR 的研究历史  11-28
  2 FSHR 在子宫组织中的表达及 FSHR 缺失引起子宫病变  28-29
  3 研究 FSHR 在子宫中表达的目的和意义  29-30
实验促卵泡素受体 mRNA 在济宁青山羊发情周期不同阶段子宫表达规律及在子宫中的分布研究  30-47
  1 材料和方法  30-38
    1.1 材料  30-33
      1.1.1 实验动物  30
      1.1.2 主要试剂、仪器及其来源  30-32
      1.1.3 主要试剂的配制  32-33
      1.1.4 试验仪器的准备  33
    1.2 方法  33-38
      1.2.1 总 RNA 的提取  33-34
      1.2.2 总RNA 的分析  34
      1.2.3 PCR 预试验  34-35
      1.2.4 荧光定量PCR 检测  35-37
      1.2.5 荧光定量数据的分析及处理  37
      1.2.6 石蜡切片标本制备  37
      1.2.7 免疫组织化学染色  37-38
      1.2.8 对照试验  38
  2 结果  38-42
    2.1 总RNA 及PCR 产物的电泳  38
    2.2 梯度 PCR 电泳  38
    2.3 阴性对照和阳性对照  38-39
    2.4 实时定量检测结果  39-42
    2.5 免疫组织化学检测  42
  3 讨论  42-46
    3.1 其它激素受体的表达与 FSHRmRNA 在子宫颈中表达  42-43
    3.2 FSHRmRNA 水平在发情周期不同阶段子宫颈中的变化与相关生殖激素的联系  43-45
    3.3 FSHR 在子宫角中表达的潜在可能性  45
    3.4 FSHRmRNA在发情周期不同阶段济宁青山羊子宫角中的表达量变化  45-46
  4 结论  46-47
参考文献  47-71
附录图版及图版说明  71-72
致谢  72-73
攻读学位期间发表的论文  73

高繁山羊发情周期不同阶段子宫FSHRmRNA表达的定量分析及FSHR免疫阳性细胞分析研究

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