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汞中毒性白内障中HSP70和MT-Ⅱ蛋白表达变化

作　者: 谢艳
导　师: 唐仁泓
学　校: 中南大学
专　业: 眼科学
关键词: 汞中毒白内障汞中毒性白内障热休克蛋白金属硫蛋白
分类号: R776.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的检测暴露于不同浓度汞蒸汽后大鼠晶状体中热休克蛋白70(HSP70)、金属硫蛋白(MT-Ⅱ)表达含量的变化,探讨其在汞中毒性白内障形成中的作用和意义。方法选用体重约350g-400g的成年雄性SD大鼠56只随机分为三组,低浓度组(24只)、高浓度组(24只)和对照组(8只)。将实验组大鼠在玻璃箱中进行静式吸入染毒,每日30分钟,每周6天。低浓度组吸入汞蒸汽最高浓度为0.01mg/m3,高浓度组吸入汞蒸汽浓度为3 mg/m3以上。正常对照组不予任何处理,检查晶状体透明后即取材。在第一次染毒后第1周末、第2周末、第3周末和第4周末分别取材12鼠(低浓度组6只、高浓度组6只)。全身麻醉后取一只眼球分离晶状体置液氮中用于做Western Blotting检测HSP70和MT-Ⅱ的表达；将大鼠全身用4%多聚甲醛溶液灌注固定后取另一眼球用于做免疫组化检测HSP70、MT-Ⅱ的表达。结果1.不同时期裂隙灯下观察晶状体浑浊度：对照组晶体透明无变化；低浓度染毒组第3周出现部分大鼠晶体前囊少量点状混浊,第4周出现晶体前囊点状混浊；高浓度染毒组第3周出现前囊浅灰色点状混浊,第4周出现前囊点状混浊伴皮质轻度混浊。2.免疫组化检测和Western Blotting检测提示HSP70在对照组中和实验组中的晶状体上皮细胞表达有显著性差异,低浓度组与高浓度组表达有差异,与浓度及时间均有相关；MT-Ⅱ在对照组和实验组的表达有差异,与时间相关,随时间延长依次递增,与浓度无明显相关；HSP70与MT-Ⅱ在晶体上皮细胞中的表达存在正相关性。结论热休克蛋白HSP70与金属硫蛋白MT-Ⅱ在汞中毒性白内障晶体上皮细胞中均有阳性表达,HSP70的表达水平与汞中毒的浓度和作用时间有明显的相关性,MT-Ⅱ的表达水平与汞中毒的时间有相关性与汞中毒的浓度无明显相关性,HSP70与MT-Ⅱ在汞中毒性白内障发展过程中两者的表达水平之间存在正相关性,提示HSP70与MT-Ⅱ在汞中毒性白内障的发生发展过程中均有一定的保护作用,HSP70与MT-Ⅱ的相互作用关系可能在汞中毒性白内障的发展过程中发挥了作用。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
符号说明  9-12
前言  12-14
1 材料与方法  14-21
  1.1 实验材料  14-16
    1.1.1 实验动物  14
    1.1.2 实验药品、试剂和仪器  14-16
  1.2 实验方法  16-17
    1.2.1 分组  16
    1.2.2 静式吸入染毒  16
    1.2.3 标本采集  16-17
  1.3 免疫组织化学检测  17-18
    1.3.1 免疫组化实验流程  17-18
    1.3.2 染色结果判定  18
    1.3.3 结果计算及统计分析  18
  1.4 Western Blotting检测分析  18-21
    1.4.1 溶液配制  18-19
    1.4.2 组织标本总蛋白的抽提  19
    1.4.3 操作方法  19-20
    1.4.4 结果计算及统计分析  20-21
2 结果  21-27
  2.1 晶状体混浊度的观察  21
  2.2 免疫组化检测HSP70、MT-Ⅱ表达定量比较结果统计分析  21-24
    2.2.1 HSP70在9组晶体上皮细胞中的表达  21
    2.2.2 MT-Ⅱ在9组晶体上皮细胞中的表达  21-22
    2.2.3 HSP70与MT-Ⅱ表达的相关性分析  22-24
  2.3 Western Blotting分析结果  24-27
    2.3.1 总蛋白浓度的测定  24
    2.3.2 Western blotting半定量分析  24-27
3 讨论  27-30
4 结论  30-31
参考文献  31-34
综述  34-46
  参考文献  41-46
致谢  46

汞中毒性白内障中HSP70和MT-Ⅱ蛋白表达变化

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