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17-DMAG对肝癌HepG2细胞的作用研究

作　者: 阳静
导　师: 冷爱民
学　校: 中南大学
专　业: 消化内科
关键词: 肝癌细胞 热休克蛋白90抑制剂 17-DMAG 顺铂
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究背景：肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类的生命健康。我国肝癌的发病患者占全球总数的55%,每年约有11万人死于肝癌。传统的外科手术及化疗或放疗等方法都有其局限性,需要我们寻找治疗肝癌的新方法。研究表明热休克蛋白90(Heat shock protein 90)是细胞内重要的分子伴侣之一,参与细胞内多种蛋白的折叠、装配及运转,对肿瘤的发生发展起着重要作用,已成为治疗肿瘤的新靶点。本实验通过研究HSP90抑制剂17-DMAG对肝癌细胞的作用,为肝癌的治疗寻找新途径。目的：研究HSP90新型抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-dimethylaminoethylamino-17-demethoxygeldanamycin, 17-DMAG)对肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法：以不同浓度的17-DMAG及5mg/L的DDP作用于对数生长期的肝癌HepG2细胞,应用MTT比色法检测其吸光度(OD)值,计算细胞生长抑制率,计算出17-DMAG对肝癌细胞株HepG2的半数有效抑制浓度(IC50),在光学倒置显微镜下观察细胞凋亡形态学变化；Annexin V-FITC/PI双染法检测经17-DMAG及DDP作用后HepG2细胞的凋亡率的变化。结果：MTT法显示17-DMAG能抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖,100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L、1000mol/L的17-DMAG及5mg/L的DDP作用于HepG2细胞24小时细胞增殖抑制率(%)分别为：15.22±1.66、23.46±1.40、37.20±2.36,48.24±1.76,14.53±1.65；48小时细胞增殖抑制率(%)分别为：23.43±1.55、34.76±1.67、56.49±3.84、60.24±3.15、28.38±2.55；72小时细胞增殖抑制率(%)分别为30.23±2.12、44.24-1.94、62.58±4.18、71.27±2.82、35.49±2.31。随着药物浓度增大,作用时间的延长,细胞增殖能力逐渐下降,呈时间-剂量依赖性,不同药物组比较有统计学意义(P<0.05),250nM的17-DMAG低浓度水平较DDP组对HepG2细胞的抑制率明显增高,有统计学差异(P<0.05)。光学显微镜观察17-DMAG作用48h后HepG2细胞密度减低,细胞体积变小,随着药物浓度增大,贴壁细胞数目明显减少。Annexin-FITC/PI双染法检测结果显示,400nmol/L 17-DMAG干预48小时后细胞早期凋亡率(%)为22.42±1.83,5mg/L顺铂干预48小时后细胞早期凋亡率(%)为6.50±1.20,正常对照组48小时后细胞早期凋亡率(%)为0.58±0.49,表明17-DMAG能诱导HepG2细胞凋亡,且17-DMAG组凋亡率明显高于5mg/L顺铂组及未干预组,有显著的统计学意义(P<0.05)。结论：热休克蛋白90抑制剂17-DMAG呈时间-剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖,随着药物浓度的加大,作用时间的延长,细胞增殖能力逐渐下降,并且能诱导HepG2肝癌细胞的凋亡。17-DMAG抑制肝癌HepG2细胞增殖及诱导HepG2细胞凋亡的作用较DDP强。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
中英文对照缩略词表  10-11
第一章 前言  11-13
第二章 材料与方法  13-18
  2.1 实验材料  13-15
    2.1.1 细胞株  13
    2.1.2 主要试剂  13
    2.1.3 主要耗材  13
    2.1.4 主要仪器  13-14
    2.1.5 主要溶剂的配制  14-15
  2.2 实验方法  15-17
    2.2.1 细胞培养  15
    2.2.2 MTT比色法检测17-DMAG对HepG2细胞增殖的抑制  15-16
    2.2.3 光学倒置显微镜下观察17-DMAG及DDP的不同浓度对细胞形态学改变  16
    2.2.4 Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率  16-17
  2.3 统计分析  17-18
第三章 实验结果  18-23
  3.1 MTT法17-DMAG对HepG2细胞增殖的抑制作用  18-20
  3.2 倒置显微镜下观察不同药物组对细胞形态的影响  20-21
  3.3 17-DMAG对HepG2细胞凋亡的影响  21-23
第四章 讨论  23-29
第五章 结论  29-30
参考文献  30-34
综述  34-47
  参考文献  42-47
致谢  47

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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