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口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

作　者: 蔡建国
导　师: 任大明
学　校: 复旦大学
专　业: 遗传学
关键词: 减毒沙门氏菌热休克蛋白抗原递呈细胞黑色素瘤酪氨酸酶相关蛋白2 口服DNA疫苗
分类号: R739.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 61次
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内容摘要

以减毒沙门氏菌作为载体的肿瘤疫苗,可以有效地把特异性肿瘤抗原递呈给免疫细胞,激发机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应,从而为抑制和治疗肿瘤提供了新的思路。热休克蛋白Hsp70可以有效将抗原肽递呈至抗原递呈细胞(APC)并将其激活,打破机体对肿瘤相关性抗原的免疫耐受。本实验将编码热休克蛋白Hsp70和小鼠黑色素瘤特异性抗原酪氨酸酶相关蛋白2基因(Trp2)的重组质粒(pcDNA3.1-Hsp70-Trp2)导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株。该重组减毒沙门氏菌疫苗以口服形式免疫小鼠C57BL/6后,有效提高了黑色素瘤细胞特异性毒性T细胞反应,并显著激活了自然杀伤细胞。CTL反应活性达到44.6%(P＜0.01),是PBS对照组(8.4%)的5倍多,自然杀伤细胞占脾脏细胞比例达到4.0%(P＜0.01),是PBS对照组(0.8%)的5倍。在免疫预防实验中,发现减毒沙门氏菌介导的口服DNA疫苗能够明显延缓C57BL/6小鼠B16F10黑色素移植肿瘤的生长(P＜0.01)。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-5
前言  5-24
  1.肿瘤抗原  5-8
  2.肿瘤免疫的发展  8-17
  3.热休克蛋白和肿瘤疫苗  17-18
  4.以沙门氏菌为载体的DNA疫苗  18-24
材料  24-29
  1.肿瘤细胞株和实验动物  24
  2.菌株和质粒  24
  3.培养基和主要试剂  24-25
  4.常用贮存液及缓冲液  25-27
  5.仪器设备  27-28
  6.引物合成  28-29
方法  29-39
  1.载体质粒的构建  29-34
  2.重组疫苗菌株的构建和鉴定  34
  3.重组疫苗菌株的稳定性检测  34-35
  4.重组疫苗菌株的侵染实验  35-36
  5.免疫方案  36
  6.免疫结果测定  36-38
  7.免疫预防实验  38
  8.统计学分析方法  38-39
结果  39-53
  1.载体质粒的构建  39-43
  2.重组疫苗菌株的构建和鉴定  43-44
  3.重组疫苗菌株稳定性检测  44
  4.重组疫苗菌株侵染实验  44-45
  5.免疫结果测定  45-51
  6.免疫预防实验  51-53
讨论  53-57
  1.提高外源抗原的免疫应答的策略  53
  2.免疫结果分析  53-55
  3.影响口服DNA疫苗免疫效果的因素  55-56
  4.口服疫苗的发展前景  56-57
参考文献  57-62
致谢  62-63

口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

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