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高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤及丹参多酚酸盐对其保护作用的实验研究

作　者: 燕建锋
导　师: 何胜虎
学　校: 扬州大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 丹参多酚酸盐 高糖 人脐静脉血管内皮细胞 抗氧化 一氧化氮(NO) 内皮素-1(ET-1)
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:本研究通过体外高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC)损伤,建立HUVEC的高糖损伤模型,探讨丹参多酚酸盐对高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法:1、体外HUVEC高糖损伤模型的建立体外培养人脐静脉血管内皮细胞(Human umbilical vascular endothelial cells,HUVEC ),随机分为正常对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L),高糖损伤1-5组(葡萄糖浓度分别为10mmo1/L、20mmo1/L、30mmo1/L、40mmo1/L、50mmo1/L),用相应的培养液培养不同时间(0h、24h、48h、72h)后收集细胞,分别进行细胞活力(OD值)、细胞培养上清液谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)的活力、丙二醛(MDA)含量的检测,并用倒置相差显微镜观察各组细胞形态的变化。2、丹参多酚酸盐对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用实验分:①正常对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L);②高糖损伤组(葡萄糖浓度为30mmo1/L );③低剂量丹参多酚酸盐组(50mg/L丹参多酚酸盐+30mmol/L葡萄糖);④中剂量丹参多酚酸盐组(100mg/L丹参多酚酸盐+30mmol/L葡萄糖);⑤高剂量丹参多酚酸盐组(200mg/L丹参多酚酸盐+30mmol/L葡萄糖);加入相应的培养液培养48小时后收集细胞,进行细胞活力、细胞培养上清液丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)的活力、内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)分泌量的测定。结果:1、体外HUVEC高糖损伤模型的建立1)正常对照组(5.5 mmol/L)、10mmol/L、20mmol/L组细胞活力值(OD值)在72小时内随培养时间的延长逐渐增高。但在同一时间段,10mmol/L、20mmol/L高糖组OD值的增长明显低于5.5 mmol/L组,组间比较有统计学差异(P=0.003)。30 mmol/L、40 mmol/L、50 mmol/L组在培养时间段内,随着时间的延长OD值逐渐下降,组间比较有统计学意义(P=0.02)。2)随着培养时间延长,各组细胞MDA的含量呈上升趋势。在各培养时间点(除0时刻外),与正常对照组相比,葡萄糖的浓度越高,MDA含量上升越明显,组间比较有统计学意义(P=0.01)。3)随着培养时间延长,各组细胞GSH-PX的含量均呈上升趋势。在各培养时间点(除0时刻外),与正常对照组相比,葡萄糖的浓度越高,GSH-PX含量增长的幅度越小,组间比较有统计学意义(P=0.02)。4)倒置相差显微镜下,培养48h的HUVEC,葡萄糖浓度10mmol/L、20mmol/L组细胞形态与正常对照组(5.5mmol/L)比较无显著差别;30mmol/L、40mmol/L、50mmol/L组细胞形态与正常对照组相比有明显不同,30mmol/L、40mmol/L组细胞均变形,其中40mmol/L组细胞变形比30mmol/L明显,但两组细胞边界尚清楚,50mmol/L组细胞变形更明显,细胞边界不清楚,有细胞脱落现象。2、丹参多酚酸盐对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用与正常对照组相比,高糖组HUVEC细胞活力(OD值)、GSH-PX含量及NO的分泌量明显下降(P=0.003、P=0.02、P=0.01),而MDA含量、ET-1的分泌量显著升高(P=0.01、P=0.003);与高糖对照组相比,经丹参多酚酸盐干预后,HUVEC细胞活力、GSH-PX含量及NO的分泌量明显回升(P=0.02、P=0.01 P=0.003),MDA含量、ET-1的分泌量显著下降(P=0.03、P=0.004)。结论:1、高糖可诱导HUVEC细胞活力下降、活性氧产生增多,抗氧化酶活性下降,导致HUVEC损伤,且随葡萄糖浓度及作用时间不同,HUVEC受损程度不同;葡萄糖浓度30mmol/L、作用48小时作为丹参多酚酸盐对体外高糖诱导损伤的内皮细胞保护作用的最佳实验条件。2、丹参多酚酸盐对体外高糖诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能通过保护细胞线粒体、清除活性氧、提高内皮细胞抗氧化酶体系的活力、抑制ET-l的分泌而实现对高糖损伤血管内皮细胞的保护效应。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-10
符号说明  10-12
前言  12-16
  参考文献  14-16
第一部分 高糖体外诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤  16-29
  1 材料和仪器  16-17
  2 实验方法  17-18
  3 统计方法  18-19
  4 结果  19-25
  5 讨论  25-27
  参考文献  27-29
第二部分 丹参多酚酸盐对高糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用  29-42
  1 材料和仪器  29-30
  2 实验方法  30-31
  3 统计学方法  31
  4 结果  31-37
  5 讨论  37-40
  参考文献  40-42
小结  42-43
综述  43-53
致谢  53-54
攻读学位期间完成的论文  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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