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头孢噻肟对细胞内钙离子跨膜行为影响的研究

作　者: 乔晓娜
导　师: 双少敏
学　校: 山西大学
专　业: 药物分析学
关键词: Fura-2 Ca2+浓度淋巴细胞头孢噻肟小鼠骨髓瘤细胞钙ATP酶
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 31次
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内容摘要

第一章概述了胞内钙离子的分布、作用及主要的测定方法,综述了钙荧光探针的光谱特性及应用。第二章采用荧光光谱法研究了温度、酸度对Fura-2-Ca2+荧光光谱的影响,计算了两者络合的解离常数Kd,并进行了热力学计算得出热力学参数。结果表明：Fura-2在较宽的温度范围内(20.0℃-50.0℃)是一种较为可靠的测量细胞钙浓度的荧光探针,而在偏碱性(pH=8.0)的条件下Fura-2已不再适合用于测量钙浓度。热力学表明Fura-2和Ca2+的络合是一个自发吸热的过程,温度的升高有利于两者的络合。结合生理条件选择37℃,pH7.5为最佳实验条件。第三章采用比率荧光法,以Fura-2为荧光探针,测定了头孢噻肟存在下人外周血淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞内钙离子浓度,通过胞内钙离子浓度的变化探讨头孢噻肟对两种细胞内钙信号跨膜行为的影响。结果表明：0.005 g/L的头孢噻肟时通过磷脂酰肌醇信号通路使胞内钙离子浓度增大,较大浓度(0.5 g/L-2 g/L)的头孢噻肟更多地是通过钙泵把胞内钙离子排出导致胞内钙离子浓度降低。小鼠骨髓瘤细胞内钙离子浓度在加入头孢噻肟后出现剂量依赖性降低,我们推测也可能是通过细胞膜上的钙泵来实现的。第四章采用Ca2+-ATPase试剂盒测定了人外周血淋巴细胞及小鼠骨髓瘤细胞膜上Ca2+-ATPase的活性,探讨人外周血淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞内钙离子浓度的降低是否通过膜上的钙泵来实现的。结果表明：人外周血淋巴细胞内加入头孢噻肟的量达到0.5g/L后,胞内钙离子可能全部是通过细胞膜上的钙泵把胞内的钙泵出胞外；而小鼠骨髓瘤细胞胞内钙离子浓度的降低可能是通过细胞膜及胞内钙库上的钙泵同时作用而实现的。

全文目录

摘要  10-11
ABSTRACT  11-13
第一章绪论  13-35
  1.1 胞内Ca~(2+)的分布及信使作用  13-16
  1.2 胞内Ca~(2+)的测定方法  16-20
    1.2.1 吸光光度法  17-18
    1.2.2 离子选择性微电极法  18
    1.2.3 光化学传感器  18-19
    1.2.4 核磁共振法  19
    1.2.5 荧光光谱法  19-20
  1.3 钙荧光探针的研究进展  20-25
    1.3.1 钙荧光探针中的螯合剂  20-22
    1.3.2 钙荧光探针的光谱特性  22-25
  1.4 Fura-2的荧光性质及在测定胞内Ca~(2+)的应用  25-26
  1.5 本论文的立题背景及主要研究内容  26-27
    1.5.1 立题背景  26
    1.5.2 主要研究内容  26-27
  参考文献  27-35
第二章荧光探针Fura-2分析性能的研究  35-45
  2.1 引言  35
  2.2 实验部分  35-36
    2.2.1 仪器和试剂  35-36
    2.2.2 储备液的配制  36
    2.2.3 Fura-2的荧光光谱测量  36
  2.3 结果与讨论  36-43
    2.3.1 Fura-2-Ca~(2+)的荧光光谱  36-37
    2.3.2 表观解离常数K_d的计算  37
    2.3.3 温度对Fura-2和Ca~(2+)的络合作用的影响  37-40
    2.3.4 热力学参数的计算  40-41
    2.3.5 酸度对Fura-2和Ca~(2+)的络合作用的影响  41-43
  2.4 结论  43-44
  参考文献  44-45
第三章头孢噻肟存在下人外周血淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞内钙离子浓度的测定  45-56
  3.1 引言  45-46
  3.2 实验部分  46-49
    3.2.1 仪器和试剂  46
    3.2.2 储备液的配制及细胞的制备培养  46-48
    3.2.3 实验方法  48-49
  3.3 结果与讨论  49-54
    3.3.1 头孢噻肟对Fura-2和Ca~(2+)两者络合行为的影响  49-50
    3.3.2 人外周血淋巴细胞内钙离子浓度的测定  50-53
    3.3.3 小鼠骨髓瘤细胞内钙离子浓度的测定  53-54
  3.4 结论  54-55
  参考文献  55-56
第四章人外周血淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞内Ca~(2+)-ATP酶活性的测定  56-65
  4.1 引言  56-57
  4.2 实验部分  57-58
    4.2.1 仪器和试剂  57
    4.2.2 实验原理  57-58
    4.2.3 实验方法  58
  4.3. 结果与讨论  58-61
    4.3.1 人外周血淋巴细胞内蛋白含量的测定  58-59
    4.3.2 小鼠骨髓瘤细胞内蛋白含量的测定  59
    4.3.3 人外周血淋巴细胞内钙ATP酶的活性测定  59-60
    4.3.4 小鼠骨髓瘤细胞内钙ATP酶活性测定  60-61
  4.4 结论  61-62
  参考文献  62-65
硕士期间发表论文题录  65-67
读研期间所获得的奖励和承担的项目  67-69
致谢  69-71
个人简况及联系方式  71-75

头孢噻肟对细胞内钙离子跨膜行为影响的研究

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