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多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸poly(I:C)对人脐血树突状细胞功能影响的研究

作　者: 龚慧敏
导　师: 卓光生
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸树突状细胞脐血体外成熟抗白血病效应
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:观察多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸(polyriboinosinic polyribocytidylic acid,polyI:C,P)对人脐血来源树突状细胞(dendritic cells,DC)体外成熟的影响,及探讨polyI:C对人脐血树突状细胞(DC)介导的抗白血病效应。方法:密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(CB-MNC),对照组以RPMI-1640培养液诱导CB-MNC生成DC,实验各组分别用加有P、重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)+重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)+重组人白细胞介素-4(rhIL-4)(GIT)及GIT+P(GITP)的RPMI-1640培养液诱导CB-MNC生成DC。光镜下观察DC形态,台盼蓝拒染法计数活细胞数,用流式细胞仪检测各组细胞免疫表型,并将细胞涂片行瑞氏-姬姆萨染色液染色,油镜下观察并摄片。从脐血中分离出单个核细胞(同前),对照组、实验组均以GIT诱导DC,并于DC培养第4d、第9d加入HL-60细胞。于培养第7d,实验组分别加入不同浓度的polyI:C,培养不同的时间。光镜下观察DC形态,并收获培养第12天的DC,应用流式细胞仪检测DC免疫表型后,将DC与急粒缓解期患者外周血淋巴细胞混合,诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞,MTT法检测其杀伤活性。结果:①各实验组均得到一定数量的典型DC;P组CD1a+、CD83+细胞比例高于对照组;GITP组CD83+细胞比例升高最明显,高于GIT组。②多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸polyI:C浓度与作用时间对CD1a+细胞比例均无影响;实验组的CD83+细胞比例及杀伤活性均高于对照组,在一定的范围内,随着浓度的增大、作用时间的延长,CD83+细胞比例增大,杀伤活性亦增强。结论:①多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸polyI:C不仅能促进脐血DC体外快速成熟,还能协同rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α促进DC体外扩增;②多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸polyI:C能促进DC的快速成熟、扩增、增强DC抗原提呈能力,从而增强人脐血来源树突状细胞介导的抗白血病免疫效应。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
前言  7-9
第一部分多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸poly(I:C)对人脐血树突状细胞体外成熟的影响  9-20
  材料与方法  9-12
  结果与分析  12-17
  讨论  17-20
第二部分多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸poly(I:C)对人脐血树突状细胞介导的抗白血病效应的影响  20-31
  材料与方法  20-24
  结果与分析  24-28
  讨论  28-31
结论  31-32
参考文献  32-36
综述  36-45
致谢  45

多聚次黄嘌呤胞嘧啶核苷酸poly(I:C)对人脐血树突状细胞功能影响的研究

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