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新西兰兔卵母细胞体外成熟、体外受精及受精卵体外培养的研究

作　者: 徐贵江
导　师: 吴信生；李碧春
学　校: 扬州大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 兔 卵母细胞 体外成熟 体外受精 卵泡浆内单精子注射 体外培养
分类号: S829.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


本实验以44只新西兰母兔为实验素材,主要研究兔卵巢表面卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵的不同体外培养条件,以优化兔卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵培养的体系,实验结果如下:1.采用切割法、针刺挤压法收集卵巢表面卵母细胞,检验不同采集方法对收集卵巢卵母细胞数量的影响。结果表明:针刺挤压法的所获得的卵母细胞数(23.63/只)显著高于切割法(16.50/只)(p<0.05)。2.比较添加不同浓度的FSH、LH对兔卵母细胞体外成熟的影响,结果表明: 1 U /mL FSH+2 U/mL LH的成熟率最高,达到46. 62 %,极显著高于对照组(TCM199+10 %FCS)的成熟率(13. 71 %,p<0.01),显著高于高浓度组(10 U /mL FSH+20 U/mL LH)的成熟率(26.83 %,p<0.05)。3.比较了不同的成熟培养时间对卵母细胞成熟率的影响,以成熟培养液培养卵母细胞,分别在成熟培养24 h、30 h、36 h、40 h对部分卵母细胞用透明质酸酶处理后观察第一极体排出率,其余部分加精子观察受精率。培养24 h、30 h、36 h、40 h的成熟率分别为21.92 %、46.62 %、52.77 %、30.71 %,这就表明:成熟时间为30、36 h的成熟率显著高于成熟时间为24、40 h的成熟率(p<0.05)。4.以TCM199+FCS+FSH+LH+E2+丙酮酸钠为基础成熟培养液,分别添加50 ng/mL及100 ng/mL的EGF、10 ng/mL及20 ng/mL的SCF、10 ng/mL及20 ng/mL的LIF,然后比较了EGF、SCF及LIF对卵母细胞成熟率的影响。结果表明:50 ng/mL及100 ng/mL的EGF能显著地提高了卵母细胞成熟率(基础成熟培养液、添加50 ng/mL及100 ng/mL的EGF组的成熟率分别为49.04 %、61.39 %和65.79 %)。SCF对卵母细胞成熟率无明显影响(成熟率分别为54.17 %、50.00 %和45.83 %),而LIF对卵母细胞成熟有明显的抑制作用(成熟率分别为54.19 %、12.50 %和4.17 %)。5.比较了上游法、直接洗涤法和Percoll密度梯度离心法三种精子处理方法对兔精子回收率及卵裂率的影响,三种方法的回收率分别为7.8 %、93.9 %、86.9 %,受精后的卵裂率分别为0 %、39.05 %、54.29 %,结果表明:Percoll密度梯度离心法是一种较理想的精子处理方法。6.比较了常规体外受精与显微注射卵裂率,结果显示,常规体外受精卵裂率(63.97 %)极显著高于显微注射卵裂率(25.65 %)(p<0.01)。7.比较了TCM199+10% FCS和DMEM+10 %FCS对胚胎(取自常规体外受精的2-细胞)发育的影响,结果表明两者之间无显著差异(p>0.05)。8.以TCM199+10 %FCS为基础的受精卵培养液,分别添加一定浓度的维生素C(100μmol/L)及β-巯基乙醇(50μmol/L),然后比较了它们对胚胎(取自常规体外受精的2-细胞)发育的影响,表明结果,100μmol/L的维生素C及50μmol/Lβ-巯基乙醇对胚胎发育无显著影响(p>0.05)。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-9
符号说明  9-10
第一章 文献综述  10-30
  1 卵母细胞的体外成熟  10-18
    1.1 COCs 的获取  10-12
    1.2 卵母细胞的分类  12
    1.3 卵母细胞成熟过程  12-13
    1.4 卵母细胞成熟的分子调节机理  13-14
    1.5 卵母细胞成熟的判断  14-15
    1.6 影响卵母细胞体外成熟的因素  15-18
  2 卵母细胞体外受精  18-27
    2.1 受精过程  19-22
    2.2 影响精子体外获能的因素  22-23
    2.3 影响体外受精的因素  23-25
    2.4 影响显微授精结果的因素  25-27
  3 受精卵的体外培养及影响因素  27-29
  4 研究目的和意义  29-30
第二章 兔卵母细胞体外成熟研究  30-42
  1 材料与方法  30-33
    1.1 试验材料  30-31
    1.2 试验方法  31-33
  2 结果与分析  33-36
    2.1 卵巢不同处理方法对获卵数的影响  33
    2.2 不同浓度的FSH、LH 对兔卵母细胞体外成熟的影响  33-34
    2.3 不同成熟培养时间对兔卵母细胞体外成熟的影响  34-35
    2.4 EGF 对兔卵母细胞体外成熟、体外受精的影响  35
    2.5 SCF、LIF 对成熟率的影响  35-36
  3 讨论  36-42
    3.1 卵巢处理方法对获卵数的影响  36-37
    3.2 不同浓度的FSH、LH 对兔卵母细胞体外成熟的影响  37
    3.3 成熟时间对兔卵母细胞体外成熟的影响  37-38
    3.4 EGF 对兔卵母细胞体外成熟的影响  38-40
    3.5 SCF、LIF 对成熟率的影响  40-42
第三章 兔卵母细胞体外受精及受精卵体外培养的研究  42-52
  1 材料与方法  42-46
    1.1 试验材料  42
    1.2 试验方法  42-45
    1.3 试验设计  45-46
    1.4 数据分析  46
  2 结果与分析  46-48
    2.1 不同精子处理方法的效果  46
    2.2 体外受精与显微注射卵裂率的比较  46-47
    2.3 M199 和DMEM 对胚胎发育的影响  47
    2.4 维生素 C 及 β-巯基乙醇对胚胎发育的影响  47-48
  3 讨论  48-52
    3.1 不同精子处理方法的效果比较  48-49
    3.2 体外受精与显微注射卵裂率的比较  49-50
    3.3 M199 和DMEM 对胚胎发育的影响  50
    3.4 维生素 C 及 β-巯基乙醇对胚胎发育的影响  50-52
全文结论  52-53
参考文献  53-62
附录  62-64
致谢  64-65
攻读学位期间发表的学术论文  65

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 兔
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