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ATF3活化及其靶基因表达与肝细胞癌侵袭转移的相关性研究

作　者: 余茂武
导　师: 黄爱民
学　校: 福建医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 原发性肝癌 ATF3 MMP-2 maspin 肿瘤转移组织芯片免疫组织化学 EMSA 图像分析
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:从蛋白水平上,检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织芯片中ATF3、MMP-2及maspin的表达情况和手术切除新鲜肝癌标本中ATF3的DNA结合活性,探讨组织芯片中ATF3、MMP-2及maspin的表达与HCC侵袭转移的关系及其意义,及新鲜肝癌标本中ATF3的DNA结合活性与HCC侵袭转移的关系及其意义。方法:对手工制作组织芯片的方法进行改良,构建含有HCC、癌旁肝组织、远癌肝组织、正常肝组织及肝内转移灶的组织芯片,应用免疫组化及彩色图像分析技术从蛋白质水平上检测了126例HCC、126例癌旁肝组织、81例远癌肝组织、20例正常肝组织和33例肝内转移灶中ATF3、MMP-2和maspin的表达情况,同时收集新鲜肝癌标本,利用凝胶电泳迁移率分析法( Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)检测其中的26例HCC、10例癌旁肝组织中ATF3的DNA结合活性情况,并综合分析ATF3、MMP-2和maspin的表达,ATF3的DNA结合活性与各临床病理参数的关系及其意义。结果:1、利用改良的手工制作组织芯片方法构建7个含有HCC、癌旁肝组织、远癌肝组织、正常肝组织以及肝内转移灶共185个点的芯片蜡块。其中中间列5个点为阳性对照点及标志点。所有蜡块点阵排列整齐,无裂纹,能完整切下。芯片经H-E、免疫组化染色后切片有效率达95%以上,芯片组织符合镜下组织学观察和进一步研究的需要。2、免疫组织化学染色结果显示ATF3及MMP-2在HCC中表达高于癌旁肝组织、远癌肝组织和正常肝组织(P<0.01),maspin在HCC中的表达明显低于癌旁肝组织、远癌肝组织和正常肝组织(P<0.01)。3、ATF3蛋白在转移组中表达高于无转移组(P<0.01),在女性HCC患者中的表达量高于男性患者(P<0.01)。此外,ATF3蛋白的表达与肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型以及病理学分级均无关(P>0.05)。MMP-2蛋白在包膜侵犯组中表达高于无包膜侵犯组(P<0.05),肝内转移灶表达量高于原发灶(P<0.05),在直径大于3cm的HCC中的表达量高于直径小于3cm的(P<0.05),但是MMP-2蛋白随HCC病理学分级的升高,相对表达量降低(P<0.05)。此外,MMP-2蛋白的表达与性别、组织学类型均无关(P>0.05)。ATF3随着HCC的转移进展表达量逐渐增高,MMP-2亦随着HCC的包膜侵袭、转移进展表达量逐渐增高,然而maspin却随着HCC病理学分级的升高,相对表达量降低(P<0.05)。此外,maspin蛋白的表达与性别、肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型以及转移情况均无关(P>0.05)。4、ATF3蛋白表达与MMP-2表达呈正相关(P<0.05),与maspin表达呈负相关(P<0.01);MMP-2蛋白表达与maspin表达呈负相关(P<0.01)。5、EMSA实验结果显示:ATF3蛋白在HCC中的DNA结合活性明显高于癌旁肝组织(P<0.01);在HCC组织中,转移组ATF3的DNA结合活性显著高于无转移组(P<0.05);此外,ATF3的DNA结合活性与HCC患者年龄、性别、组织学类型、肿瘤大小、包膜侵犯、病理学分级均无明显相关性(P>0.05)。结论:1、ATF3蛋白在转移组中表达高于无转移组,在女性HCC患者中的表达量高于男性患者。此外,ATF3蛋白表达与肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型以及病理学分级均无关。2、MMP-2蛋白在包膜侵犯组中表达高于无包膜侵犯组,肝内转移灶表达量高于原发灶,在直径大于3cm的HCC中的表达量高于直径小于3cm的,但是MMP-2蛋白随HCC病理学分级的升高,相对表达量降低。此外,MMP-2蛋白的表达与性别、组织学类型以及转移情况均无关。ATF3及MMP-2均随着HCC进展表达量升高,然而maspin却随着HCC病理学分级的升高,相对表达量降低。此外,maspin蛋白的表达与性别、肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型以及转移情况均无关。3、ATF3蛋白和MMP-2蛋白在肝癌组织中高表达,而maspin蛋白在肝癌组织中低表达。ATF3蛋白表达与MMP-2表达呈正相关,与maspin表达呈负相关;MMP-2蛋白表达与maspin表达呈负相关。在肝癌的侵袭转移过程中,ATF3和MMP-2、maspin之间存在相互调控机制。4、在EMSA检测结果中,ATF3的DNA结合活性在HCC中高于癌旁肝组织,转移组ATF3的DNA结合活性高于无转移组。提示ATF3的DNA结合活性与HCC的侵袭转移密切相关。5、ATF3及MMP-2的高表达及maspin的低表达与HCC的发展密切相关,它们可能在HCC侵袭转移过程中发挥重要作用,可作为预测HCC转移潜能的有价值的参考指标。

全文目录

英、汉缩略名词对照表  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
第一部分 ATF3、MMP-2 及 maspin 与肝细胞癌侵袭转移关系的组织芯片研究  12-33
  前言  12-14
  材料和方法  14-19
  结果  19-28
  讨论  28-32
  小结  32-33
第二部分 ATF3 基因活化与肝细胞癌侵袭转移关系的研究  33-47
  前言  33-34
  材料与方法  34-41
  结果  41-44
  讨论  44-46
  小结  46-47
全文小结  47-48
参考文献  48-52
致谢  52-53
综述  53-61

ATF3活化及其靶基因表达与肝细胞癌侵袭转移的相关性研究

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