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载脂蛋白(Apolipoprotein,Apo)是在分子量、免疫性及代谢上具有多态性的蛋白质,是受体结合的识别标志,参与脂蛋白与细胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢过程,在脂质代谢的过程中起着极为重要的作用。本文通过体外试验,探讨了载脂蛋白在脂质代谢的过程中的作用机理。采用胶原酶两步灌流法获取大鼠原代肝细胞,用不同浓度的DL-乙硫氨酸处理24~48h,检测肝细胞培养基中ALT,AST浓度和肝细胞中TG,apoAⅠ,apoB ,LDL与HDL的浓度。采用油红O染色观察处理后肝细胞内脂肪滴变化情况。结果显示:每只大鼠可获得(2~4)×108个肝细胞,成活率在95%左右,培养的肝细胞形态完整、生长良好,可用于脂质代谢的研究。肝细胞被处理后,随着DL-乙硫氨酸浓度的增大,ALT,AST含量升高,并且随着时间延长而升高;TG的含量增大,相同浓度梯度下,24h比48h含量高; ApoAⅠ的含量增大,处理24h时,模型组各组与对照组有极显著差异(P<0.01),24h与48h含量没有太大变化;apoB的含量减小,处理24h,48h后,2.0,3.0,4.0,5.0mmol/L模型组与对照组都有极显著差异(P<0.01);LDL,HDL的含量增大,处理24h,48h后,2.0,3.0,4.0,5.0mmol/L模型组与对照组有极显著差异(P<0.01)。油红O染色后光镜下显示,细胞胞浆内出现明显的脂质堆积,橘红色脂滴数量逐渐增多,有的地方染色后聚结成片,胞核圆形,蓝染,有的细胞膜边缘已不完整,符合肝细胞脂变形态特征,与对照组比较有显著差异(0.01<P<0.05)。通过以上试验,选用2.0mmol/LDL-乙硫氨酸处理大鼠原代肝细胞24h,制备脂肪肝体外模型。不同剂量的泽泻粗提物作用于该模型,用上述测定方法,比较TG,apoB与LDL浓度的变化,探求载脂蛋白在脂质代谢过程中的作用机理。结果显示:添加泽泻的各组TG含量明显降低,apoB含量升高,LDL含量降低,24h比48h时效果显著。泽泻粗提物的各浓度中,以5.0μg/mL为最佳。为更好的研究动物性脂肪肝,首先要建立理想的研究模型。本实验成功制备了DL-乙硫氨酸诱导体外肝细胞脂肪变性,建立脂肪肝的动物体外模型。经过动态观察其演变过程,能针对性地探究脂肪肝发病的细胞机理。从生化角度,利用这一技术进一步探讨载脂蛋白在脂肪肝发病机理中的调控作用。
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