学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

酿酒酵母Zds1/Sch9在Ras-cAMP信号通路中的功能研究

作　者: 张国畅
导　师: 马平生
学　校: 天津大学
专　业: 生物化工
关键词: 酿酒酵母 Sch9/Zds1 Bcy1 Ras/cAMP信号通路 PKA 出芽生殖
分类号: Q936
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 58次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

Ras/cAMP信号通路中,Sch9/Zds1的功能对调节酵母细胞PKA活性乃至热激抗性以及其调节亚基Bcy1的定位具有重要作用,同时Bcy1的定位也与碳源类型密切相关。研究不同碳源条件下Sch9/Zds1如何共同作用实现对PKA活性以及Bcy1定位的调控,将有助于酿酒酵母信号通路的研究,同时为高等真核生物的信号通路研究提供借鉴。本研究表明,正常PKA水平的菌株中过量表达ZDS1可使PKA水平降低,而低PKA表型的菌株中过量表达ZDS1可使PKA水平升高。这说明酵母细胞可能通过Zds1响应不同的PKA表型从而自我调节PKA的水平。不同碳源条件下,与野生型相比,zds1Δ突变株和sch9Δ突变株中,Bcy1均由细胞质向细胞核转移。野生型和sch9Δ突变株中过量表达ZDS1可使Bcy1由细胞核向细胞质转移。野生型细胞中过量表达SCH9可使Bcy1由细胞核向细胞质转移,但zds1Δ突变株中过量表达SCH9不能使Bcy1由细胞核向细胞质转移。这说明Sch9可能作用于Zds1的上游对Bcy1的定位进行调控。通过比对热激结果与荧光结果,发现两部分结果之间存在着共同的趋势,推测PKA的活性可能与Bcy1的定位之间存在着直接关系。研究中还发现,部分正在进行出芽生殖过程的细胞中,Zds1在芽颈处大量聚集,而且碳源的差异也没有造成明显的区别。这表明,Zds1可能在酿酒酵母出芽生殖的过程中起着重要的作用。

全文目录

中文摘要  3-4
ABSTRACT  4-7
前言  7-8
第一章文献综述  8-21
  1.1 G 蛋白与细胞信号转导  8-10
  1.2 RAS 基因及其蛋白产物  10-11
  1.3 cAMP 信号通路的组成及作用  11-12
  1.4 酿酒酵母cAMP 信号转导通路  12-17
    1.4.1 G 蛋白偶联的受体体系（Gpr1-Gpa2）  13-14
    1.4.2 Ras-cAMP 信号通路组成  14-15
    1.4.3 cAMP 途径的主要靶标--cAMP 依赖的蛋白激酶PKA  15-16
    1.4.4 PKA 调节亚基Bcy1 的细胞定位  16-17
      1.4.4.1 信号转导通路的区位划分  16
      1.4.4.2 Zds1 与Bcy1 定位之间的相互作用关系研究进展  16-17
  1.5 FGM 信号通路及其主要作用元件  17-19
    1.5.1 Sch9 和PKA 的相互作用关系  19
  1.6 cAMP-PKA 途径与胁迫响应之间的关系  19-20
  1.7 本论文的研究思路  20-21
第二章材料与方法  21-35
  2.1 实验材料  21-27
    2.1.1 质粒、菌株与引物  21-23
      2.1.1.1 质粒  21
      2.1.1.2 菌株  21-22
      2.1.1.3 引物  22-23
    2.1.2 主要实验仪器  23-24
    2.1.3 主要试剂  24-25
    2.1.4 培养基  25-26
    2.1.5 主要溶液  26-27
  2.2 实验方法  27-35
    2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化  27-28
      2.2.1.1 CaCl_2 法  27
      2.2.1.2 电转化法  27-28
    2.2.2 小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB 法）  28
    2.2.3 酵母染色体的快速分离  28-29
    2.2.4 PCR 扩增反应  29-30
    2.2.5 DNA 的限制酶消化  30
    2.2.6 DNA 的连接反应  30-31
    2.2.7 DNA 的琼脂糖凝胶电泳  31
    2.2.8 从琼脂糖中回收DNA  31
    2.2.9 酵母细胞的转化方法  31-32
    2.2.10 酵母中质粒的回收  32
    2.2.11 酵母交配型的验证  32-33
    2.2.12 不同交配型酵母细胞之间的杂交  33
    2.2.13 产孢及四分体孢子拆分  33
    2.2.14 Dilution 实验方法  33-34
    2.2.15 热击实验方法  34-35
      2.2.15.1 水浴热击  34-35
第三章结果与讨论  35-53
  3.1 Zds1/Sch9 对PKA 活性表型的影响  35-39
    3.1.1 SCH9 基因的缺失  35
    3.1.2 ZDS1 基因的缺失  35-36
    3.1.3 SCH9 和ZDS1 基因的双缺失  36-37
    3.1.4 质粒YEplac195-ZDS1 的构建  37
    3.1.5 Zds1/Sch9 对PKA 活性表型的协同作用  37-39
  3.2 Zds1/Sch9 对PKA 调节亚基Bcy1 定位的调控  39-52
    3.2.1 质粒YEplac181-SCH9 的构建  39-41
    3.2.2 质粒YCplac22-GFP-BCY1 的构建  41-42
    3.2.3 质粒YEplac181-ZDS1-GFP 的构建  42-43
    3.2.4 缺失SCH9 对Bcy1 定位的影响  43-44
    3.2.5 缺失ZDS1 对Bcy1 定位的影响  44-46
    3.2.6 过量表达SCH9 以及过量表达ZDS1 对Bcy1 定位的影响  46-48
    3.2.7 SCH9 和ZDS1 双缺失对Bcy1 定位的影响  48-50
    3.2.8 Zds1 在细胞内定位情况的初探  50-52
  3.3 Bcy1 的定位与PKA 活性之间的关系推测  52-53
第四章总结与展望  53-55
  4.1 主要工作总结  53-54
  4.2 相关工作展望  54-55
参考文献  55-60
致谢  60

酿酒酵母Zds1/Sch9在Ras-cAMP信号通路中的功能研究

内容摘要

全文目录

相似论文