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Notch信号通路在骨形态发生蛋白9诱导的多潜能干细胞成骨分化中的作用初步研究

作　者: 刘强
导　师: 翁亚光；唐敏
学　校: 重庆医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 多潜能干细胞 Hey1 Notch信号通路 骨形态发生蛋白9 DAPT
分类号: Q254
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


第一部分Hey1基因在骨形态发生蛋白9介导的多潜能干细胞成骨分化过程中表达及其功能研究目的:明确BMP9介导的MSCs成骨分化中Hey1的表达情况,并探讨Hey1对BMP9介导的MSCs成骨分化作用。方法:利用腺病毒表达载体(AdBMP9/AdGFP、AdHey1/AdRFP)处理C2C12,用细胞化学染色和活性定量测定早期成骨标志物ALP,建立定量RT-PCR检测方法测定Notch信号通路靶基因Hey1;结果:AdBMP9作用下,1、3、5、7 d ALP活性持续增加(P<0.05),ALP的含量与AdBMP9具有剂量依赖性;Hey1一过性升高,其与AdBMP9亦呈剂量依赖性,同时发现Hey1可协助AdBMP9上调ALP的含量(P<0.05),但不能单独起效。结论:AdBMP9具有较强的诱导多潜能干细胞成骨分化作用,早期成骨作用随着时间延长而逐渐增强,并与AdBMP9的量存在量效关系,Hey1表现出一过性升高,过表达Hey1可以协助BMP9的诱导成骨作用,这与Hey1的量亦呈正相关,但是Hey1本身却不能促进成骨分化。第二部分Notch信号通路在骨形态发生蛋白9诱导的多潜能干细胞成骨分化中的作用机制初步研究目的:探讨Notch信号通路在BMP9介导的MSCs成骨分化中的作用。方法:用细胞密度试验(间接)和Notch信号通路抑制剂(DAPT)处理C2C12(直接)了解Notch信号通路在BMP9介导的MSCs成骨分化中的作用;用细胞化学染色和活性定量测定早期成骨标志物ALP;定量RT-PCR检测方法测定Hey1及Notch信号通路配体、受体表达变化。结果:AdBMP9处理的C2C12细胞Notch信号通路配、受体有不同程度的上调,其中受体Notch4和配体Jag-1上调最为明显(分别为11.3和5.1倍);高细胞密度组(细胞紧密生长)比低细胞密度组(细胞尚未完全接触)受体表达显著升高,配体Jag-2、Dll-1表达亦升高,配体Dll-3表达下调明显;80%和40%细胞密度组ALP量和Hey1表达均高于20%组(P<0.05);DAPT抑制剂组中ALP活性明显降低(P<0.05)并且Hey1表达下调。结论:Notch信号通路激活时BMP9的促成骨作用加强,Hey1的表达升高是其加强的原因;在Notch信号通路被阻断时,BMP9的促成骨作用减弱,Hey1的表达下降是其减弱的原因。

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学 > 细胞生理学 > 细胞分化
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