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骨形态发生蛋白2活性肽在体内体外诱导成骨的实验研究

作　者: 卢宏伟
导　师: 郭晓东
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: 水凝胶骨形态发生蛋白活性肽骨诱导异位成骨成骨分化鼠成骨前体细胞
分类号: R683
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

【目的】探讨根据骨形态发生蛋白2(BMP-2)自行研制合成的活性多肽在体内和体外诱导成骨的作用。【方法】①制备骨形态发生蛋-2活性多肽。②制备体内实验所需的水凝胶载体。③将重组人骨形态发生蛋-2(rhBMP-2)及骨形态发生蛋-2活性多肽与水凝胶复合作为实验组,以空白水凝胶作为对照组。④动物试验分6组。A组:单纯水凝胶作为空白对照;B组:5 mg活性多肽与水凝胶复合组;C组:10 mg活性多肽与水凝胶复合组;D组:20 mg活性多肽与水凝胶复合组;E组:40 mg活性多肽与水凝胶复合组;F组:5μg重组人骨形态发生蛋-2与水凝胶组复合组作为对照组。⑤将60只大鼠随机按上述方法分组,每组10只。每只大白鼠左侧大腿作1cm的切口,制备股四头肌肌袋模型。将各组实验材料植入股四头肌肌袋中。大鼠培养至第6周作放射学检查(X-ray,CT),并处死作组织学(HE染色、Vonkossa染色)检查。比较各组成骨效果。⑥将重组人骨形态发生蛋-2及不同浓度的活性多肽与鼠成骨前体细胞(MC3T3-E1)复合培养。重组人骨形态发生蛋-2作为对照组,普通培养基作为空白对照。分别在3、5、7天检测碱性磷酸酶(ALP)活性,比较各组差异。【结果】①第6周时X线和CT扫描见:A、B、D组无明显高密度影;E组可见不甚明显的高密度影;C、F组有明显团块状高密度影。②组织学观察见:6组的水凝胶载体均充分降解,未见残留物。A、B、D组未见成骨细胞、骨小梁及新生骨;E组见部分成骨细胞和软骨陷窝;C、F组见团块状新生骨和新生骨小梁,周围包绕大量成骨细胞,外周可见新生血管。③碱性磷酸酶检测见:重组人骨形态发生蛋白-2与不同剂量活性多肽所复合的细胞的碱性磷酸酶活性比空白对照组明显增高。重组人骨形态发生蛋白-2组碱性磷酸酶活性最高。活性多肽组随剂量升高碱性磷酸酶活性逐渐增高,并有时间相关性,随培养时间增加,碱性磷酸酶活性逐渐增高,在第5天达到高峰,随后逐渐下降。【结论】骨形态发生蛋白活性多肽在大鼠体内能够诱导异位成骨,并能诱导鼠成骨前体细胞向成骨细胞分化,效果明显,其作用接近于骨形态发生蛋白-2,在骨修复方面具有良好的应用前景。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-13
材料与方法  13-21
结果  21-24
讨论  24-26
附图  26-33
参考文献  33-36
致谢  36

骨形态发生蛋白2活性肽在体内体外诱导成骨的实验研究

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