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RNA干扰沉默胃癌HDAC1基因表达的实验研究

作　者: 庄涵虚
导　师: 王小众；马旭东
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 胃癌组蛋白乙酰化组蛋白甲基化 HDAC1 RNA 干扰
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)、组蛋白H3、H4乙酰化在胃癌患者异常表达及其意义,寻找胃癌分子治疗的新标靶;设计针对HDAC1基因的小干扰 RNA片段,观察HDAC1小干扰RNA对人类胃癌MGC803细胞增殖、凋亡的影响;探讨HDAC1小干扰RNA对MGC803细胞组蛋白甲基化、乙酰化的影响。【方法】1、免疫组织化学方法检测HDAC1、组蛋白H3、H4乙酰化在胃癌、慢性浅表性胃炎,萎缩性胃炎、中重度不典型增生病理组织中的表达,统计学分析探讨其临床意义。2、设计针对HDAC1基因4个小干扰RNA片段,经Lipofectamine 2000脂质体转染入MGC803细胞,RT-PCR及蛋白免疫印迹法(Western Blot)筛选最佳干扰片段。3、应用四唑盐(MTT)法绘制细胞生长曲线,观察HDAC1 siRNA对MGC803细胞增殖的影响;TUNEL分析细胞调亡。4、Western blot检测HDAC1 siRNA对BCL-2,Caspase-9、Caspase-3、P21、C-myc蛋白表达及组蛋白H3、H4乙酰化、组蛋白H3K9甲基化的影响。【结果】1、HDAC1在胃癌表达率73.71%,显著高于其他各组(P<0.05),与胃癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期相关;组蛋白H3乙酰化在胃癌的高表达率41.17%,显著低于其他各组(P<0.05),与胃癌的分化程度、淋巴结转移有关。2、筛选出最佳干扰片段,序号为sense 5’-CCCGGAGGAA AGUCUGUUATT-3,antisense 5- UAACAGACUUUCCUCCGGGTG-3’。3、HDAC1 siRNA能上调P21表达,抑制MGC-803细胞增殖;下调CL-2,Caspase-9、Caspase-3、C-myc蛋白表达,诱导细胞凋亡。4、HDAC1 siRNA上调组蛋白H3、H4乙酰化,下调H3K9甲基化水平。【结论】1、胃癌组织中HDAC1蛋白高表达,组蛋白H3乙酰化低表达,与病理分化程度及淋巴结转移等相关,提示HDAC1、乙酰化组蛋白H3可能有促进胃癌的发生、发展和浸润、转移的作用。2、HDAC1 siRNA对MGC803细胞有显著的抑制作用,可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并可上调组蛋白H3、H4乙酰化,下调H3K9甲基化的表达水平;有望成为胃癌靶向基因治疗的新工具。其机制有待进一步研究。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
前言  8-10
第一部分 HDAC1、组蛋白 H3、H4 乙酰化在胃癌中异常表达及其意义  10-23
  材料和方法  10-15
  结果  15-21
  讨论  21-23
第二部分 HDAC1的SiRNA的合成、筛选、及沉默效益  23-33
  材料和方法  23-29
  结果  29-31
  讨论  31-33
第三部分 HDAC1 的SiRNA 对胃癌细胞增殖、凋亡、组蛋白乙酰化、甲基化的影响  33-42
  材料和方法  33-35
  结果  35-39
  讨论  39-42
结论  42-43
参考文献  43-47
致谢  47-48
文献综述  48-54
  参考文献  52-54

RNA干扰沉默胃癌HDAC1基因表达的实验研究

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