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FZD2、FZD3基因对涎腺腺样囊性癌增殖及侵袭能力的影响

作　者: 郑斐斐
导　师: 卢友光
学　校: 福建医科大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 涎腺腺样囊性癌 Wnt信号通路 FZD2 FZD3 细胞增殖侵袭能力
分类号: R739.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 22次
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内容摘要

涎腺腺样囊性癌是最常见的腮腺恶性肿瘤之一,其特有的侵袭转移方式造成涎腺腺样囊性癌治疗后易复发,至今仍缺少有效的防治措施。从分子水平寻找参与涎腺腺样囊性癌侵袭、转移相关分子,将为涎腺腺样囊性癌的诊断、治疗以及预后判断提供新的依据。目的在本课题组前期证实FZD2、FZD3基因与SACC发生、转移有关,可能起到抑癌作用的基础上,进一步探讨FZD2、FZD3基因表达对涎腺腺样囊性癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法第一部分针对FZD2、FZD3基因序列设计合成siRNA,转染SACC-M细胞,实验分成四组:siRNA-FZD2组、siRNA-FZD3组、NC阴性对照组和空白组。siRNA转染后采用蛋白免疫印迹法检测FZD2、FZD3蛋白的表达,使用CCK-8试剂盒观察SACC-M细胞增殖情况,应用侵袭小室分析细胞侵袭特征。第二部分采用Ad-EasyTM系统,使FZD2、FZD3基因在大肠杆菌中同源重组,构建Ad-FZD2、Ad-FZD3腺病毒载体,酶切鉴定正确后以脂质体转染的方式在AD293细胞中包装,测定病毒滴度后选择最适感染强度感染SACC-M细胞。采用蛋白免疫印迹法检测感染后FZD2、FZD3蛋白的表达,使用CCK-8试剂盒观察SACC-M细胞增殖情况,应用侵袭小室分析细胞侵袭特征。结果第一部分siRNA-FZD2、siRNA-FZD3转染SACC-M细胞48h后蛋白免疫印迹显示,与阴性对照组比较siRNA-FZD2、siRNA-FZD3组蛋白表达量明显减弱。应用CCK-8法观察发现,siRNA干扰后的SACC-M细胞增殖曲线位于对照组SACC-M细胞增殖曲线之上,SACC-M细胞增殖能力明显增强。侵袭小室结果显示siRNA干扰后的SACC-M细胞比对照组SACC-M细胞穿过小室的数目明显增多,SACC-M细胞侵袭能力增强。第二部分重组腺病毒以MOI=100感染SACC-M细胞72h后蛋白免疫印迹显示,与GFP阴性对照组比较Ad-FZD2、Ad-FZD3蛋白表达量明显增强。应用CCK-8法观察发现,腺病毒感染后的SACC-M细胞增殖曲线位于对照组SACC-M增殖曲线之下,SACC-M增殖能力明显降低。侵袭小室结果显示过表达FZD2、FZD3的SACC-M细胞比对照组SACC-M细胞穿过小室的数目明显减少,SACC-M细胞侵袭能力降低。其结果与siRNA干扰的结果一致。结论FZD2、FZD3基因在涎腺腺样囊性癌增殖及侵袭中起关键作用,可能对涎腺腺样囊性癌有一定的抑制作用。进一步研究,可以为涎腺腺样囊性癌预后判断和基因治疗寻找新的靶点提供依据。

全文目录

英文缩略词表及符号说明  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分 FZD2、FZD3 基因的siRNA 对SACC-M 细胞增殖及侵袭能力的影响材料和方法  11-23
  材料与方法  11-17
  结果  17-18
  讨论  18-23
第二部分 FZD2、FZD3 基因过表达对SACC-M 细胞增殖及侵袭能力的影响材料与方法  23-40
  材料和方法  23-31
  结果  31-37
  讨论  37-40
本文总结  40-41
参考文献  41-46
综述  46-56
  参考文献  53-56
致谢  56-57
个人简历  57

FZD2、FZD3基因对涎腺腺样囊性癌增殖及侵袭能力的影响

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