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微小隐孢子虫CP405/CP585双价核酸疫苗的研究

作　者: 郭晓雯
导　师: 张西臣
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 微小隐孢子虫 CP405基因 CP585基因真核表达核酸疫苗
分类号: S852.52
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种人兽共患原虫病,引起腹泻等症状。本研究应用DNA重组技术将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum )保护性抗原基因克隆入真核表达载体,构建微小隐孢子虫CP405/CP585双基因真核共表达DNA疫苗,免疫BALB/ C小鼠,诱导产生了特异性免疫应答,并具有一定的保护作用。将重组质粒转染Hela细胞后,得到稳定表达的细胞株。在重组质粒转染的细胞中用间接免疫荧光方法检测到特异蛋白,通过Western blot试验表明所得蛋白具有反应原性。利用真核表达质粒在不同的条件下免疫BALB/c小鼠,对其诱导的免疫应答的动态变化进行检测,结果为重组质粒免疫鼠特异性抗体IgG滴度随着免疫次数的增加,呈现逐渐升高趋势,其中试验第8组pVAX1-CP405-IRES-CP585滴鼻组与阴性对照组相比差异极显著(P<0.0l),试验8组小鼠的CD4+T淋巴细胞数与空白对照组相比差异极显著(P<0.01), CD4+/ CD8+T的比值与对照组相比差异极显著(P<0.01)。对攻击感染具有较好的保护作用,试验组与对照组相比排出卵囊明显减少,排卵囊持续时间平均缩短3-5d,其中最佳免疫组即pVAX1-CP405-IRES-CP585滴鼻组的减虫率可达到65.5%。

全文目录

内容提要  4-5
中文摘要  5-6
Abstract  6-11
前言  11-13
第一篇文献综述  13-23
  第一章隐孢子虫病免疫学研究进展  13-18
    1.1 免疫诊断  14-15
    1.2 隐孢子虫病免疫机制  15-16
    1.3 免疫防治  16-18
  第二章寄生虫核酸疫苗研究进展  18-23
    1.1 核酸疫苗的研究概况  18
    1.2 核酸疫苗诱导免疫反应的机理  18-19
    1.3 核酸疫苗的特点  19-20
    1.4 核酸疫苗抗寄生虫感染  20-21
    1.5 IRES 的研究进展  21-23
第二篇研究内容  23-59
  第一章隐孢子虫保护性抗原基因的克隆和序列分析  23-36
    1、材料和方法  23-28
    2、结果  28-34
    3、讨论  34-35
    4、小结  35-36
  第二章隐孢子虫核酸疫苗重组质粒的构建与表达  36-49
    1、材料与方法  36-43
    2、结果  43-46
    3、讨论  46-48
    4、小结  48-49
  第三章核酸疫苗接种BALB/C 小鼠的免疫保护性研究  49-59
    1、材料与方法  49-52
    2、结果  52-55
    3、讨论  55-58
    4、小结  58-59
结论  59-60
参考文献  60-65
导师及作者简介  65-67
致谢  67

微小隐孢子虫CP405/CP585双价核酸疫苗的研究

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